过表达内质网小分子热激蛋白提高拟南芥的衣霉素抗性.pdfVIP

2009年 12月 山东师范大学学报( 自然科学版) Dec ．2009 第24卷第4期 J our nal o f Shandong Nor ma l Uni ve r si t y( Nat ur al Sci enc e) V01．2 4 No．4 过 表 达 内 质 网 小 分 子 热 激 蛋 白 提 高 拟 南 芥 的 衣 霉 素 抗 性 冯玉芹 张景霞 刘 箭一 ( 山东师范大学生命科学学院，2 0 014，济$ ／／第一作者26 岁，女，硕士生) 摘要 内质网小分子热激蛋 自是热激蛋白家族成员，具有分子伴侣活性．当植物受到内质网胁迫( EB—st mm) 时，内质网小 分子热激蛋 白具有缓解 内质网胁迫的功能．我们将CaMV3 S启动子驱动的内质网小分子热激蛋 白基因At HSP22 ．0导人拟南芥， Nor t he r n—bl o t t i ng印迹分析表 明，内质网小分子热激蛋白在转基 因拟南芥 中呈现组成型表达．转基 因株系农霉素抗性强于对照 ，说 明At HSP2 2．0的过营表达增强r 拟南芥 的衣霉素抗性 ，缓解了ER—s t r e 日． 关键词拟南芥； 内质网小分子热激蛋白；衣霉素 中图分类号Q78 文献标识码A doi ：10 ．3969 ／j ．i s s n．100 1—4748．2009．04 ．033 几乎所有真核细胞都通过产生热激蛋白来响应高温胁迫 ．热激蛋 白在蛋 白质折叠、跨膜运输、小细胞骨架及核骨架稳定 等方面发挥重要作用⋯ ．在高等植物 中主要有两种热激蛋 白，大分子量热激蛋白和小分子量热激蛋白 【20，其 中16- 30KD的小 分子热激蛋 白( s HSP) 是最丰富的日】．内质网小分子热激蛋 白( ERs HSP) 是定位于内质网中的一类s HSP．ERs HSP最早是从热 激处理 的玉米 ‘41和大麦0 1中被发现的，后来人们又在高温诱导 的番茄o 61、拟南芥 ‘“、大豆Ⅲ、豌豆 【9 1以及低温诱导的马铃 薯 ¨则等植物中发现了ERs HSP ． 衣霉素是一种神经毒素类药物，它能通过抑制UDP—N一 乙酰葡糖氨杀死细胞．在衣霉素存在下，在 内质网中合成的天冬 酰胺一连接的糖蛋白不能与N一连接 的多糖发生糖基化 ，从而不能正确折叠，引发未折叠蛋 白应答(unf ol ded pr ot ei n r e spons e ， UPR)n 11，包括 内质网分子伴侣和折叠酶等的表达上调、诱导 内质网相关性降解( ER—as s oci at ed de gr ada 垃on ，ERAD) ，甚至导 致 内质网相关性细胞凋亡 ¨2J ． Hel m等从拟南芥中克隆了内质网小分子热激蛋 白At HSP22 ．0 eDNA，At HSP22 ．0有一个信号肽，C一端具有的四肽残基 为 已知 的内质网滞留信号．体外实验证实，At HSP22 ．0mRNA翻译产物定位于内质 网中 ¨⋯ ．本实验利用At HSP22 ．0 eDNA构建 了由CaMV3 S启动子驱动的植物表达载体pCAMBI A3 301，运用农杆菌介导方法将拟南芥内质网小分子热激蛋 白基 因 At HSP22 ．0导入拟南芥 ．转基因拟南芥 的Nor t hern—bl ot t i ng及衣霉索抗性分析显示，At HSP22 ．0在植株中呈组成型表达 ，与对 照拟南芥相 比，转基因拟南芥的衣霉素抗性提高 ． 1材料与方法 1 ．1 实验材料野生型拟南芥( 哥伦 比亚型) ( Ar abi dops i *t hal i ana L．ecot y pe Col umbi a) 、植物表达载体pCAMBI A330 1、克隆载 体pRTIOI 为本实验室保存，根癌农杆菌( AgroMaer i umt umef aci em) 菌株GV3 10 1，At HSP22 ．0 cDNA( U2 3026) 购 自美国俄亥俄 州大学ABRC． 1．