日本血吸虫TβRII样基因胞外段的克隆、表达及初步鉴定.pdfVIP

356 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 2O10，26 (4) 文章编号 ：1002—2694(2010)04—0356一O4 日本血吸虫TI~RII样基因胞外段的 克隆、表达及初步鉴定* 陈 姗 ，马长玲，高志岩 ，麦景莹，赵晶晶，朱郇悯 ，李小敏，李 孜 摘 要 ：目的 获得 日本血吸虫TGF—p受体 II(T~RID样基 因的cDNA 完整序列，克隆、原核表达其胞外段蛋 白序列，并 进行初步免疫学分析。方法 应用 RACE方法获得SjTpRI1样基 因cDNA全长序列，构建其胞外段(即N端)原核表达载体， 在大肠埃希菌中IPTG诱导表达 ，表达产物行十二皖基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS)分析。纯化重组蛋 白并免疫 大 鼠制备抗血清 ，应用 WesternBLotting方法初步鉴定重组蛋 白。结果 获得 日本血吸虫 SjT~RII样基 因的 cDNA全长序 列，为2283bp，编码 760个氯基酸，其 中胞外段长 53 p，编码 l77个氧基酸 。构建 的重组质粒在大肠埃希菌 中成功表达 ，经 亲和层析获得 了高纯度蛋 白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别，表明其具有免疫原性和抗原性。结论 首次获得 日 本血吸虫T~RII样基 因的eDNA全长序列，其胞外段可在厚核表达系统 中获得具有免疫原性和抗原性的高效表达 ，为进一步 研 究该蛋 白的功能奠定 了基础。 关键词 ：日本血吸虫；sj邢RII；克隆；基 因表达 中图分类号 ：R3832 文献标识码 ：A Cloning，expressionandpreliminaryidentificationoftheT~RII—like extracellularfragmentproteinfrom Schistosomajaponicum CHEN Shan，MAChangling，GAOZhi—yah，MAIJingying，ZHAOJing-jing，ZHUXun-min，LIXiao-min，LIZi (DepartmentoJ、PathogeHiLBiologyal2 ImmunologY，GuangzhouMedicalCollege．Guangzhou510182．China) ABSTRACT：TostudytheSjT~RI1一likegenefromSchistosomajaponi~“Ⅲ (S．japoni~um)，thecodingregionof TI3RII- likewasobtainedbyRACEandtheextracellularfragmentofSjT~RII—likegenewasclonedintotheprokaryoticexpressionvec— torpET28a (+ )thenexpressedinE．colibyIPTG induction．TherecombinantproteinwasdetectedbySDS ． SD rats wereimmunizedwiththepurifiedrecombinam proteininordertoobtaintheantiseraandanalyzeitsimmunogenicityandanti— genicitybyWesternblotting．hwasfoundthattheencodingsequenceofthenovelsjT?／RII—likegenewas2283bp (encoding760 aminoacids)．Recombinantexpressionplasmidwassuccessfullyconstructed，whichcouldelicitspecificantibodiesefficientlvin SDrats，indicatingitsimmunogenicitya