色谱分析法概论.pptVIP

第9章 色谱法概论 第一节 色谱法概述 一、色谱法的起源和发展 1．1906年由俄国植物学家迈克尔·茨维特(Michael Tswett) 创立 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 1906年 迈克尔·茨维特提出色谱法 1931年 库恩 奥地利化学家 胡萝卜素植物色素分离 30年代 离子交换色谱建立 40年代 分配色谱创立，平板色谱法 1952年 气相色谱法建立（GC） 1968年 高效液相色谱法建立（HPLC） 80年代：超临界流体色谱法（SFC） 90年代：毛细管电泳法（CE） 90年代末：毛细管电色谱法 现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析 二、色谱法定义、实质和目的 定义：一种利用固定相和流动相对组分进行物理或物理化学分离的分析方法 实质：分离 目的：定性分析或定量分析 三、分类： 1．按流动相与固定相的状态分： 2．按分离机制分： 3．按固定相的固定方式分： 一、色谱过程 指被分离组分在两相中的“分配”平衡过程。 混合物中，若2个组分的分配系数不等，则被流动相携带移动的速率不等，即形成差速迁移而被分离。 以吸附色谱为例见图示 吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 (三)分配系数和分配比 分配系数K（平衡常数） 指在一定温度和压力下，组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与流动相中的浓度比（色谱过程的相平衡参数） 分配比(容量因子)k (capacity factor) 在平衡状态下，组分在固定相与流动相中的质量比 tR与k的关系： * * * * 图谱 An Introduction to Chromatography （chromatography） 植物的石油醚提取液在碳酸钙吸附剂填充的玻璃管中分离出叶绿素及其他色素 色带 色谱法发展简史 固定相——除了固体，还可以是液体 流动相——液体或气体 色谱柱——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质 流动相 固定相 类型 液相色谱 液体 固体 液-固色谱 液体 液体 液-液色谱 气体 固体 气-固色谱 气体 液体 气-液色谱 气相色谱 吸附色谱：利用物理吸附性能的差异 分配色谱：利用分配系数的不同 离子交换色谱：利用离子交换原理 空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同 键合相色谱法： 毛细管电泳法和毛细管电色谱法:利用电细管和电的性质相结合而建立的 平面色谱 纸色谱 薄层色谱 薄膜色谱 柱色谱 填充柱色谱 毛细管柱色谱 Column chromatography plane chromatography paper chromatography thin layer chromatography thin film chromatography 4.按使用目的分类 分析用色谱仪 制备用色谱仪 流程色谱仪 色谱法 气相色谱法（GC） 液相色谱法（LC） 广义的毛细管电泳法 柱色谱法 经典液相柱色谱法 高效液相色谱法（HPLC） 平板色谱法（TLC、PC） 色谱法简单分类 填充柱色谱法 毛细管柱色谱法（CC） 第一节 色谱过程与术语 检测器 色谱柱 样品室 二、 色谱图及常用术语 （一）色谱图： 由检测器输出的电信号强度对时间或流动相流出体积作图得到的曲线 t 信号 基线：仅有流动相通过检测器时的响应信号 色谱峰：检测器对组分的响应信号 噪音：各种未知的偶然因素引起的基线起伏 3、色谱峰宽度（反映柱效） ? 峰宽W ? 半峰宽W1/2 ? 标准差σ 1、峰面积（定量） 2、峰高（定量） W = 4σ=1.699W1/2 色谱峰 W1/2 = 2.355σ fs =0.95~1.05 拖尾因子(tailing factor, fs) 又叫对称因子 A W0.05h f s 2 = A B A 2 + = 正常峰（对称峰） 非正常峰 前沿峰 拖尾峰 色谱峰 ——fs 0.95 ——fs 1.05 1、保留时间tR（定性） 2、死时间t0 （二）保留值 从进样开始到某组分色谱峰顶（浓度极大点）的时间，即组分在色谱柱中的停留时间或组分流经色谱柱所需要的时间。