肝癌靶向性AGAP表达载体构建及生物信息学分析.pdfVIP

第40卷第 2期 温 州 医 学 院 学 报 Vo1．40NO．2 2010年 3月 JournalofW enzhouM edicalCollege Mar．2Ol0 论 肝癌靶向性AGAP表达载体构建及生物信息学分析 金思思，吴金明，黄智铭，吴建胜 ，申苏建 (温州医学院附属第一医院 消化 内科，浙江 温州 325000) [摘 要] 目的 ：构建肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma，HCC)特异性镇痛抗肿瘤肽(analgesic— antitumorpeptide，aGar)基因真核表达载体 ，利用计算机辅助分析和预测所表达蛋 白质 的理化和结构 特征，为探索生物毒素靶向抗肝癌作用奠定基础。方法：提取 东亚钳蝎总RNA，用RT—PCR法扩增 出AGAP基 因，与载体 pGL3／AFP连接构建重组质粒，酶切及测序鉴定，并利用蛋 白质分析软件对其表达的蛋白二级 结构水平及一些生物学特性进行预测，并转染HepG2细胞检测其是否表达。结果：重组质柱所表达的 目的 多肽经软件分析 ，发现在二级结构上没有变化，亲水性、抗原性等生物学活性也未受影响，转染HepG2细 胞后能成功表迟。结论：人AFP基因顺式作用元件调控AGAP真核表达载体构建成功。 [关键词] 甲胎蛋白；镇痛抗肿瘤肽；真核表达载休；肝肿瘤 [中图分类号] R730．5 [文献标识码] A [文章编号] 1000—2138(2010)02—0141—04 Construction of hepatocellular carcinoma specific AGAP expression vector and bioinformatic analysis JIN Sisi，wU JJnmfng．HUANG Zhiming，wU j]ansheng SHEN Sujian． Departmellt of Gastroenterology the FirSt AFfiliated Hospital of Wenzhou Med1cai College．Wenzhou．325000 Objective：Toconstructagene—modifiedhepatocellularcarcinoma(HCC)specific AGAP expression vector regulated by the cis—acting element of AFP．The physicochemica1propertyand structural characteristics of the protein were analyzed and predicted by computer—aided analyslS to establish a basis for exploring biotoxin thepapy for tumor．Method：The AGAP DNA fragmentwas amplifled through RT—PCR from the totalRNA of Chinese ButhusMartensiiKarsch． Itwas then Cloned intotheplasmidpGL3／AFP．TherecombinantplasmidpAFP—AGAPwasidentifiedbyrestriction endonucleases and nucleotide sequence．The protein analysis software were utilized to predict the flexibility，hydrOphilicity，and antigenicity of the new AGAP protein．Then the expression levels ofAGAPmRNAweredetectedbyreversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT—PCR)afterthe recombinant plasmid being transfected into HepG2 cell line．Result