氯乙酸AS-D萘酚酯酶（特异性酯酶）染色.pptVIP

 氯乙酸AS-D萘酚酯酶(特异性酯酶）染色 方法步骤 注意事项  α-丁酸萘酚酯酶染色 * * 1. 目的 掌握氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色的原理、方法、注意事项及临床意义。 2. 原理 氯乙酸AS-D萘酚被细胞内氯乙酸AS-D萘酚酯酶(naphythol AS-D chloroacetate esterase,NAS-DCE)水解，产生AS-D萘酚，再与重氮盐偶联，生成不溶性的红色沉淀，定位于胞质内酶的所在部位。 固定 新鲜干燥的涂片在固定液中固定30s～60s，或用甲醛蒸气薰蒸5 ～ 10min，水洗，待干。 放入作用液中，作用37℃30min，水洗。 苏木素染液复染5min，水洗，待干，镜检。 结果判断　阳性反应为红宝石色颗粒，定位于胞质中。 冬季室温低，萘酚和坚牢紫酱GBC盐不易溶解，可放37℃温箱促溶。 配制作用液时可先将萘酚在丙酮中溶解后再加其它液体。 氯乙酸萘酚酯酶最适宜反应pH值为7.0 ～ 7.6；此酶不被氟化钠抑制。 涂片染色后不能长期保存。 底物配制后可能出现混浊，但不影响染色效果。 重氮盐可选用新品红、坚固蓝等。 氯乙酸AS-D萘酚酯酶主要分布在粒细胞系和肥大细胞内，因此又称粒细胞酯酶。氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色较过氧化物酶染色更具特异性。AML时，原始粒细胞呈阳性反应；AMOL时白血病细胞一般呈阴性反