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专题一 基因工程 第二节 基因工程的基本程序 编写：刘鹏程 审核：汪合伍 时间：2011.1.13 班级 姓名 【学习要求】 1.理解基因工程的原理 2.掌握基因工程的基本操作步骤 【学习重点】 基因工程的基本操作程序 【认知性问题】 一、目的基因的获取： 1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。 2．获取目的基因的方法 (1)从基因文库中获取目的基因 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ②种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 (2)利用PCR技术扩增目的基因。 ①PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ②条件：已知目的基因的 序列。 ③过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在 ______的作用下进行延伸形成DNA。 ④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数) (3)人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。 二、基因表达载体的构建 1．表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因等。 2．启动子：位于基因的 ，它是 的部位， 结合驱动基因转录产生mRNA。 3．终止子：位于基因的 ，终止 。 4．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；使目的基因 ____ 和发挥作用。 5．标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 6．不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。 三、将目的基因导入受体细胞 (一)转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和 的过程。 (二)方法 1．将目的基因导入植物细胞 (1)农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 ②转化：目的基因插人 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 (2)基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 (3)花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我的的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的） 2．将目的基因导入动物细胞 (1)方法： 注射技术。 (2)操作程序：目的基因表达载体 →取卵(受精卵) →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的 _________________________内发育→新性状动物。 3．将目的基因导人微生物细胞 (1)原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 (2)转化： 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ _________ 细胞吸收DNA分子。 四、目的基因的检测与鉴定 1．检测 (1)方法：标记了的 、抗原抗体杂交。 (2)内容 ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入 。 ②检测目的基因是否转录 。 ③检测目的基因是否翻译成 。 2．鉴定： 鉴定、抗病鉴定等。 【效果检测】 1、构建基因组DNA文库时，首先雷分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA?? C、总mRNA?? D、tRNA??( ) A.540个 B.8100个 C.17280个 D.7560个 2．在基因工程中，科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（ ） A.结构简单，操作方便 B.遗传物质含量少 C. 繁殖速度快 D.性状稳定，变异少 3．因工程的操作步骤：使目的基因与运载体相结合，将目的基因导入受体细胞，检测目的基因的表达是否符合特定性状要求，提取目的基因，正确的操作顺序是（　）　　A． 　　B. 　C． 　D．工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （　）　　A．人工合成基因 　　　　　B．目的基因与运载体结合　　C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测和表达就分于结构而论，质粒是 A、环状双链DNA分子??B、环状单链DNA分于C、环状单链RNA分子