1-2014-金品服务科研.pptx

重温经典、引领创新 ——“金品”服务科研; “Easy”克隆技术——快速、高效“1+1” “TransStart”——最好的热启动技术 “TransStart FastPfu”——快速高保真酶 “TransDirect PCR” ——无需纯化gDNA的PCR “All-in-One”——简单到极致的反转录 “EasySee”——?Western Blot可视化 “TransLipid”——新型转染试剂 “Double Luciferace”—报告基因检测的生力军 “TransScript Ⅱ”高温反转录酶;研发指导理念;“Easy”克隆技术;开发思路;;;连接反应成为一个双分子作用的过程;EASY 克隆; ;载体的选择EASY 克隆和T4 DNA Ligase克隆比较（TOPO载体和普通TA载体比较）;克隆感受态细胞的选择;“TransStart”热启动技术;开发思路;开发思路;不同热启动方法比较;开发思路;“TransStart”热启动原理——双封闭法;“TransStart”双封闭法原理;“TransStart”热启动技术的应用;TransStart Taq 扩增能力和特异性比较;“TransStart”热启动技术的应用;TransStart Green qPCR SuperMix TransStart Top Green qPCR SuperMix 数据的准确 使用TransStart Taq，增强特异性，数据准确 双阳离子配方，减少引物二聚体的形成，保证数据准确 应用Passive Reference Dye或PCR Enhancer ，保证数据准确 作用调整加样误差引起的管间差异 ——Passive Reference Dye的必要性 ——Passive Reference Dye的特异性;独特双阳离子Buffer 配方，减少引物二聚体，提高特异性;Passive Reference Dye的校正作用（必要性）;不同的仪器公司，生产各自仪器的同时，也生产与之相配套的qPCR SuperMix。其产品配有Passive Reference Dye。 但是不同的仪器，所需Passive Reference Dye不同，不同厂家的仪器与试剂之间，无法实现兼容。 e.g.ABI 7900/7500， Reference Dye I/II 世界上没有任何一种Passive Reference Dye，可以适用于各个品牌的荧光定量PCR仪。 TransGen： Reference Dye I/II/III, PCR Enhancer ;TransStart Green qPCR SuperMix UDG 数据的准确 具有TransStart Green qPCR SuperMix的所有特点。 采用UDG酶和dUTP组合，有效防止PCR产物的交叉污染（得到的CT值比实际CT值小或其它影响）。 原理：dUTP取代dTTP，扩增产物中“U”取代了“T”，如果有PCR产物的残留污染，在孵育步骤时（50℃ 2 min）,UDG酶可以消化含“U”的PCR产物，而不会影响含“T”的模板，去除污染。随后的变性步骤（ 95℃ 10 min ），彻底失活UDG酶，避免了降解新的扩增产物的可能。;“TransStart FastPfu”—— 快速高保真酶;开发思路;目前世界上，保真性相对优秀的酶为Pfu系列。多用于基因功能的研究、定点突变等要求高保真的实验。 最主要的缺点 聚合速度慢，仅有0.5 kb/min。 以定点突变试验为例，一般需要5小时以上甚至十余小时，大大制约了实验进度。 扩增能力较Taq系列酶弱。;Pfu酶能否和Taq酶 具有同样的扩增速度呢？ 但一般认为，合成速度的提升，往往会以牺牲保真性为代价。 如何在提高聚合速度的同时还能确保保真性，成为改造Pfu酶必须解决的问题。 ;快速高保真酶——TransStart FastPfu、FastPfu Fly ;TransStart FastPfu DNA Polymerase 快速： Plasmid DNA: 4 kb/min, cDNA、Genomic DNA: 2 kb/min 速度：FastPfu 是传统Pfu的4~8倍(传统 Pfu: 0.5 kb/min) 保真性：FastPfu 是传统Pfu 的3倍 ;TransStart FastPfu Fly DNA Polymerase 更高的扩增效率 更快的速度 FastPfu Fly： 2~6 kb/min FastPfu： 2~4 kb/min 更高的保真性 FastPfu Fly： 是传统Pfu