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大肠杆菌（E.coli）超级感受态细胞制备
H. Inoue, H.Nojima, and H. Okayama (1990)
High efficiency transformation of Escherichia coli with plasmids. Gene 96:23-28
溶液：
SOB培养基 1L 500ml 1000
2％ Bacto tryptone 20g 10g
0.5% yeast exctract 5g 2.5g
10 mM NaCl 0.6g/L 0.3g
2.5mm KCl 0.18g/L 250mM 5ml 10ml
10mM MgCl2 2.03g/l. .6H2O 2M 2.5ml 5ml
10mM MgSO4 2.46g/l. .7H2O 1M 10ml 20ml
培养细菌用。
TB buffer (transformation buffer):
10mM Hepes (or Pipes) 2.5g/l Hepes
15mM CaCl2 2.27g/l (.2H2O)
250mM KCl 18.6g/l
55mM MnCl2 10g/l
除MnCl2外，所有组分以固体加水中溶解和搅拌混匀，并以KOH调pH6.7，再将MnCl2 溶解上述溶液中，用0.45μm滤膜抽滤除菌，存放于4℃备用。
4℃预冷所需的器皿：离心机转子、移液管、枪尖 和eppendorf管。
步骤：
1， 取5ml SOB 加到100ml 的小烧瓶中，从新培养的平板上接种一个单克隆。过夜培养。
2， 在一个2L的烧瓶中加200ml SOB，接种预培养的菌液1ml。在18℃，置于摇床剧烈振荡（200-250rpm）培养至OD660=0.6，大约需要1.5-2天。
（注：下面所有处理应该在低温下操作）
3， 将培养物和低温离心管放置冰中，10min，将培养物转到预冷的离心管中。
4，离心收集：4℃、3000rpm、10min。去上清，倒置于面纸上。加原体积1/3 （17ml）的冷的TB buffer，冰上冷浴10min。
5，离心收集：4℃、3000rpm，10min。去上清，倒置于面纸上。小心地将细胞重新悬浮于原体积 1/12 （4ml）的冷TB buffer。再加DMSO 280μl，轻旋振，置冰上10min。
6，分装细胞悬浮液，每200μl 为单位加到预冷的 eppendorf管中，立刻放于液氮中冷冻。
7，取出，存放于-80℃。至少可存放1个月而无明显的效率下降。
备注：
1，感受态细胞脆弱易碎，其细胞壁具缝，因此在准备中需要轻柔操作，不可剧烈振荡或以移液管吸取吹打来悬浮细胞。离心时也不可转速过大，5000g可以引起细胞裂解。
2，制备过程中，总是保持细胞低温冷却，不能使温度上升。
3，液氮冷冻可以使感受态细胞转化效率明显高一些。
5，此法不适于BL21菌株，因此用BL21菌株制备感受态细胞时的培养温度应该是30或37度。有证据显示，以Inoue 方法制作的感受态效率可以用下面的处理得以提高：在冷冻之前， 用DT T加以处理（加3.5％ v/v 2.2M DTT，10mM KAc pH 6 溶液，然后置于冰冷浴10min）。
6，热休克时间因菌株而异。DH5α 或 JM109
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