实验壬基酚对红鲤鱼的急性毒性.pptVIP

毒理学中研究外源化学物的基础毒性主要是进行体内试验，即是以实验动物为研究对象，最终向外源化学物毒害主体—-人类外推。选用的动物体重差异不应超过平均体重的10%。为判定受试物对不同性别动物的毒性反应有否差异，除特殊要求外，实验中一般均应采用两种性别动物进行试验。所用动物进入实验室后，于实验开始前应观察一周以上，以删除不健康的动物，并使实验动物适应环境。受试生物的选择方法和标准见理论课教材。 实验目的： 1、学习急性毒性试验的原理和方法； 2、探求化学污染物的致死剂量，以初步评估其对人类的可 　　能毒害的危险性； 3、掌握半数致死剂量LD50或半数致死浓度LC50计算方法和意 　义（结果评定)； 4、学习化学污染物急性毒性的评价方法。 急性毒性试验：是指以某种接触途径将受试物（外源性化学物）高剂量一次性给予或24h内多次给予受试物后，在短时间内观察动物所产生的毒性反应，这样的试验即急性毒性试验。试验测定致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量LD50或半数致死浓度LC50来表示。LD50或LC50：一定时间内能够引起受试生物50％死亡的单一受试物剂量或浓度，是经过记录、统计后计算得的估计值。LD50的计算参考以下公式：（农药登记毒理学试验标准 GB 15670—1995/fujian/standard/guojiabiaozun/gbm/M156700j.htm）1gLD50=Xk-d(∑Pi-0.5)Xk—最大剂量对数，d—等比级数，Pi—各组死亡率，i—组号 95％可信限＝log-1(logLD50±1.96SlogLD50) 实验分成3个染毒剂量组和1个未染毒对照组，每组数量相同，平均体重（13.9±3.80）g，分别置于30L水池中。染毒组剂量分别设计为50、100和200mg/kg(NP质量/鱼体重，下同)。染毒方式为腹腔注射，注射前后各12小时不喂食，各剂量组注射体积为每尾200μl。NP-食用油溶液：染毒剂量的设计参考文献3。先对购买的鱼称平均重量,按照每条鱼注射200ulNP-食用油溶液配制50mg/kg体重、100mg/kg体重、200mg/kg体重溶液，配好后装在试剂瓶中避光保存。 1、红鲤鱼的驯养：从市场购来大小相近的红鲤鱼，平均体长实验前现测，在实验室驯养一周。染毒前禁食12小时。 2、预试验： 　各组自己设计浓度，然后组长分工运行该试验。 （1）分缸：取三个12升的玻璃缸，加入驯养缸中的源水各9升，每升处标上刻度线。按生物测试标准，从驯养缸中选择体长相近、健康活泼的鱼各三条，分别放入三个缸中。 (2) 浓度设计：查文献得知，缺乏现成的壬基酚对金鱼类的LC50值。综合壬基酚毒性试验研究的一些结果，初步将预试验浓度按等比级数设在三个浓度值（自己设计）。 (2) 称量并记录。 (3) 测水的硬度、温度和PH值。 (4) 分别对三个缸染毒，在各缸贴上标签，记录染毒时间、染毒浓度。 (5) 曝气。 (6) 观察现象：前8小时连续观察，记录各浓度死亡数、死亡时间、主要异常症状，将死亡的鱼取出，做好标记，存放冰箱以备以后生理毒性的研究之用。 (7) 根据预试验得出红鲤鱼2/3以上死亡和1/3以下死亡的浓度。 3、正式试验 (1) 分缸：取8个12升的玻璃缸，加入驯养缸中的源水各9升，每升处标上刻度线。按生物测试标准，从驯养缸中选择体长相近、健康活泼的鱼各6条，分别放入8个缸中。 (2) 浓度设计：依据预试验的结果确定最大浓度和最小浓度，并在两者之间按等比级数再设计两个浓度，同时设一空白对照组，各组做两个平行。 (3)–(7)步骤同预试验的“(2)-(6)”。 记录内容：高剂量组(浓度为？)的鱼在用药后？h开始死亡，？h后全部死亡；中剂量组(？)的鱼在？h后开始死亡；低剂量组(？)在染毒？h后开始死亡。全期毒性试验观测时间为？H，红鲤鱼在染毒？h后趋于稳定，各组存活的鱼不再死亡，并逐渐恢复正常。 4、LC50的计算5.试验结论：1）、本试验表明，壬基酚对红鲤鱼具有毒性作用，其半致死浓度（或剂量）为　　　　　，可信限为　　。根据毒性分级标准，毒性强度为　　　（参考教材）。2）、本试验所得结果可为壬基酚对红鲤鱼的亚慢性、慢性等毒理学试验设计浓度或剂量提供参考依据。 * 实 验 一 壬基酚对红鲤鱼的急性毒性 实验原理 logLD50的标准误（S）: 材料和用具：（略） 试验动物的饲养环境 恒定的温度：22±3℃ 湿度：30~70% 照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格 染毒途径的选择: 染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒