色谱学原理与实际应用课件.pptVIP

第三讲 色谱学原理与实际应用（2） －－非常压色谱 减压柱 中低压柱 高压液相色谱 气相色谱 3.1 减压柱层析（抽柱 Vacuum Liquid Chromatography) 1 简介 简便、实用、快速的层析方法，其基本原理与吸附层析相同，适用于较大量的制备性分离或提取物的极性分段划分。（粗分） 2 操作 VLC柱（或布氏漏斗）、磨口收集瓶（或抽滤瓶）、真空泵。 a 装柱（抽实） b 上样（一般干法，抽实） c 洗脱（低极性逐渐到高极性的梯度洗脱，每次都抽干，类似 pTLC多次展开的过程） d 收集 3 注意事项 a 真空度 20~70 mmHg b 洗脱剂极性 由小到大梯度递增 c 交叉色带 3.2 中低压柱层析 1）快速色谱（ 闪式柱层析，Flash Chromatography ） 1 简介 柱短（20cm），分离时间短，快，分离效率高。 闪式硅胶（Flash Sicica gel，230～400目，球形） 加压层析 约2 bar 10mg-10g 样品 10-15min 2 用途 常用于快速分段/初步纯化，尤适于常压柱上长时间分离过程中易分解的化合物，拖尾少 3 操作 与普通柱层析法基本相同。 a 装柱：湿法 干法（20cm） b 上样：拌样 湿法 c 洗脱：Rf 0.2-0.3 加压 2）低压柱 适用样品：10 mg～1 g 压力小于5 bar 固定相：硅胶、氧化铝、聚酰胺、反相硅胶等各种分离材料，普通粒度，因此在低压下也有较快流速。吸附也不是特别严重。 一般配有自动收集器、紫外监测器和低压恒流泵/氮气瓶，有的还可联机监控、操作和分析。 有些商品化的预制色谱柱，如E. Merck公司产的Lobar柱系列产品（粒度150～250目），其分离效果有时可接近HPLC的分辨率，但载样量远超过制备型HPLC。 也可自己装填。 2）中压液相色谱系统（ Medium-pressure LC ） 适用样品：100 mg～100 g 压力5～40 bar 固定相：硅胶、氧化铝、聚酰胺、反相硅胶等各种分离材料，较细较均匀颗粒（硅胶常直接用薄层层析材料（粒度15um，约700目）），分辨率很高，但常压下基本流不动，在中压下才有较快流速。有一定程度的吸附。 均配有自动收集器、紫外监测器和压力输液泵，有的还可联机监控、操作和分析。如BUCHI公司生产的中压液相系统，还配有一系列规格的耐压玻璃－塑料加强色谱柱，其中有些为预制柱，如反相柱，有些可自己装填分离材料。还可选配其它类型的监测器如示差折光监测器。 2 操作 a 装柱（氮压） b 上样（干法或湿法，样品柱） c 洗脱（所有管材均耐压耐溶剂） d 收集（较智能化自动收集，等时间或按峰收集） 3.3 高压液相色谱系统（High Pressure LC，High Performance LC） 检测器 HPLC用途 指纹图谱分析（成份展示、比较与定性） 定性与定量分析（如比较鉴别、含量测定） 色谱条件选择 制备分离 纯度分析 分析型、半制备型、制备型HPLC RP-HPLC使用方法 1. 溶剂需超声脱气 2. 样品的前处理（抽干，除杂: 滤膜，离心；预柱/小反相柱） 3. 样品溶成合适浓度 4. 手动进样的操作（六通阀） 5. 进样量的摸索（在保证色谱峰分离效果的前提下尽量多进样，特别是 分析性和半制备型用于制备分离） 6. 等度洗脱与梯度洗脱 7. 多次进样的洗脱流程的一般组成（预平衡；分离洗脱阶段、 洗柱阶段、平衡阶段） 8. 合适洗脱流程的摸索（先连续梯度，再缩小范围找到合适的等 度或梯度范围；尽