不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定.pptVIP

脯氨酸含量的测定 实验原理 当植物遭受渗透胁迫，造成生理性缺水，植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株内的水分状况。所以其含量可作为植物缺水的参考指标。在酸性条件下，茚三酮与脯氨酸反应生成红色化合物。其含量与色度成正比，故可用分光光度计测定。 * * 实验九 不同渗透胁迫条件下脯 氨酸含量的测定 实验目的及要求 1、学会常用实验材料的培养及处理； 2、掌握植物脯氨酸含量的测定方法； 3、掌握常用实验仪器的使用操作及提高实验动手能力； 4、学会文献的查阅与整理，熟悉实验设计的一般原则、方法步骤，提高自己的实验设计能力、操作能力、独立分析问题、解决问题能力和综合运用能力。 实验内容及条件： 实验内容： 1、实验植物种子的处理及幼苗的培养； 2、不同渗透胁迫条件下的胁迫处理； 3、脯氨酸含量的测定。 条件： （使用仪器） 1、恒温培养箱 2、分光光度计 3、恒温水浴锅 4、恒温恒湿光照培养箱 方法步骤 1、根据实际情况进行实验分组，实验小组人数控制在3～4人，并选定小组长； 2、实验课题的选定，实验小组分工，实验用品的领取，实验要求的讲述； 3、各组实验工作安排； 4、实验工作 （1）材料的选择、培养及处理； （2）脯氨酸含量的测定； （3）实验课题总结及实验报告。 实验建议课题 （一）实验材料的选择 可选择不同实验材料，但要求易培养、容易得到。 （二）渗透胁迫处理； 不同渗透胁迫条件、胁迫时间对植物的胁迫处理； （三）不同渗透胁迫条件对植物脯氨酸积累的影响 采用张志良的方法进行。 实验器材与试剂 1.实验仪器：722型分光光度计，水浴锅，烧杯，移液管。 2.实验试剂：冰醋酸，3%磺基水杨酸，标准脯氨酸溶液，酸性茚三酮试剂。 实验步骤 1. 标准曲线的绘制（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液1.0，2.0，3.0 ， 4.0 ， 5.0及6.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为2，4，6，8，10μg/ml。（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液，加入2ml蒸馏水，2ml 3%磺基水杨酸、2ml冰醋酸和4ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中显色1h。（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置分层，使色素全部转至甲苯溶液。（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯（红色甲苯相）溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线。