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不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定.ppt
脯氨酸含量的测定 实验原理 当植物遭受渗透胁迫,造成生理性缺水,植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株内的水分状况。所以其含量可作为植物缺水的参考指标。在酸性条件下,茚三酮与脯氨酸反应生成红色化合物。其含量与色度成正比,故可用分光光度计测定。 * * 实验九 不同渗透胁迫条件下脯 氨酸含量的测定 实验目的及要求 1、学会常用实验材料的培养及处理; 2、掌握植物脯氨酸含量的测定方法; 3、掌握常用实验仪器的使用操作及提高实验动手能力; 4、学会文献的查阅与整理,熟悉实验设计的一般原则、方法步骤,提高自己的实验设计能力、操作能力、独立分析问题、解决问题能力和综合运用能力。 实验内容及条件: 实验内容: 1、实验植物种子的处理及幼苗的培养; 2、不同渗透胁迫条件下的胁迫处理; 3、脯氨酸含量的测定。 条件: (使用仪器) 1、恒温培养箱 2、分光光度计 3、恒温水浴锅 4、恒温恒湿光照培养箱 方法步骤 1、根据实际情况进行实验分组,实验小组人数控制在3~4人,并选定小组长; 2、实验课题的选定,实验小组分工,实验用品的领取,实验要求的讲述; 3、各组实验工作安排; 4、实验工作 (1)材料的选择、培养及处理; (2)脯氨酸含量的测定; (3)实验课题总结及实验报告。 实验建议课题 (一)实验材料的选择 可选择不同实验材料,但要求易培养、容易得到。 (二)渗透胁迫处理; 不同渗透胁迫条件、胁迫时间对植物的胁迫处理; (三)不同渗透胁迫条件对植物脯氨酸积累的影响 采用张志良的方法进行。 实验器材与试剂 1.实验仪器:722型分光光度计,水浴锅,烧杯,移液管。 2.实验试剂:冰醋酸,3%磺基水杨酸,标准脯氨酸溶液,酸性茚三酮试剂。 实验步骤 1. 标准曲线的绘制(1)在分析天平上精确称取25mg脯氨酸,倒入小烧杯内,用少量蒸馏水溶解,然后倒入250ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,此标准液中每ml含脯氨酸100μg。(2)系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶,分别盛入脯氨酸原液1.0,2.0,3.0 , 4.0 , 5.0及6.0ml,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,各瓶的脯氨酸浓度分别为2,4,6,8,10μg/ml。(3)取6支试管,分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液,加入2ml蒸馏水,2ml 3%磺基水杨酸、2ml冰醋酸和4ml酸性茚三酮溶液,每管在沸水浴中显色1h。(4)冷却后各试管准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置分层,使色素全部转至甲苯溶液。(5)用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯(红色甲苯相)溶液至比色杯中,以甲苯溶液为空白对照,于520nm波长处进行比色。(6)标准曲线的绘制:先求出吸光度值(Y)依脯氨酸浓度(X)而变的回归方程式,再按回归方程式绘制标准曲线。
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