DEN 诱导Fischer大鼠二段法致癌新方法探讨.ppt

200mg/kg (ip) 10ppm 雄性大鼠肝脏肝细胞变异灶 DEN 诱导Fischer大鼠二段法致癌新方法探讨 张琳 中国药品生物制品检定所 国家药物安全评价监测中心 前言 常用的致癌剂有芳香胺类、黄曲霉素、亚硝胺类及氨基偶氮染料。 致癌方法多采用饮水，混合饲料，灌胃等投与致癌物。 DEN（二乙基亚硝胺）是一种已知的致癌剂，它的靶器官是肝脏。 。 实验方法 第一天根据体重腹腔注射DEN(200mg/kg)启动 第二天开始在饮水中加入DEN(10ppm)进行促进，给药组给药时间为3个月 检测指标 体重： 给药开始第1周每天测定一次， 以后每周测定1次 摄食量：每周测定1次 饮水量：每周测定1次 血液学：红细胞数、白细胞数、血红蛋 白、平均红细胞容积、血小板 数、白细胞分类 检测指标 病理组织学：脑*、心脏*、肝脏*、脾脏*、肺* 、肾脏*、睾丸*、卵巢* 、脑垂体*、甲状腺*、舌、食道、气管、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、直肠、盲肠、胰腺、膀胱、子宫、肾上腺、肠系膜淋巴结、胸骨、其它病变部位 雄性体重 雌雄体重 雌性大鼠肝脏病变发生率 雄性大鼠肝脏病变发生率 实验结果 通过HE染色对各脏器的组织病理学检查发现： 对照组：无明显组织学异常 单次腹腔注射组：肝脏增生雌性40％，雄性70％ 单次腹腔注射＋饮水给药组：雄性肝脏增生100％，肝增生性结节30％，肝细胞癌10％；雌性肝脏增生100％，肝增生性结节30％，肝细胞癌5％ 结论 DEN是目前应用比较多的致癌剂，其靶器官为肝脏，它的致癌过程可以分为：启动肝细胞→肝细胞增生灶→肝增生节结→肝细胞癌。 单次腹腔注射大剂量DEN（200mg/kg）可以引起少量肝细胞的癌前病变，同时饮水给予低剂量DEN（10ppm），能明显加快肝脏肿瘤的形成。 讨论 此方法短时间内能明显加快肝脏肿瘤的形成，具有时间短见效快的特点。 传统的二段法致癌实验多选用两种不同致癌物或对实验大鼠肝脏部分切除后进行致癌实验，操作复杂，容易受到其它因素干扰，影响致癌效果。 本实验在屏障系统内的IVC内进行，最大限度的排除了外界因素对实验的影响，另外DEN具有一定的挥发性IVC系统的使用对实验人员也起到了很好的保护作用。 采用同一种供试品进行实验排除了不同供试品间的相互影响，因此能够更直接的反映DEN的致癌效果。 国内的致癌实验大多选用SD大鼠或Wistar大鼠进行致癌实验，本实验选用的F344大鼠是国际上广泛使用的近交系大鼠，尤其适合各种肿瘤的研究。 本实验的结果充分说明此二段法能够简便快速诱发F344大鼠肝癌的形成，方法简便，快捷可操作性强。 * 合计 雄性 单次ip(200mg/kg)+饮水组(10 ppm) 单次ip组(200mg/kg) 生理盐水组 60 (只) 20 (只) 20 (只) 20(只) 雌性 单次ip(200mg/kg)+饮水组(10oom) 单次ip组(200mg/kg) 生理盐水组 60 (只) 20 (只) 20 (只) 20 (只) 周 天 周 雄性体重 天 周 肝增生 肝结节 肝肿瘤 肝增生 肝结节 肝肿瘤 200mg/kg (ip) 10ppm雄性大鼠肝脏癌前病变 200mg/kg (ip) 雌性大鼠肝脏癌前病变 200mg/kg (ip) 10ppm 雄性大鼠肝脏肝细胞变异灶 200mg/kg (ip) 10ppm 雌性大鼠肝脏血管内皮瘤 混入饲料或饮水给药 腹腔注射加饮水给药 给药途径 2年（大鼠）1年6个月（小鼠） 3个月 实验时间 最少400只，雌雄各半 120只 ，雌雄各半 动物数量 普通致癌实验 二段法致癌实验 * * *