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第八章 分子发光分析法 概 论 分子发光的类型 分子发光分析法的特点 分子发光的类型 分子吸收外来能量时，分子的外层电子可能被激发而跃迁到更高的电子能级，这种处于激发态的分子是不稳定的，它可以经由多种衰变途径而跃迁回基态。这些衰变途径包括辐射跃迁和非辐射跃迁过程，辐射跃迁过程伴随的发光现象称为分子发光。 分子发光的类型 按分子的激发模式 如果分子通过吸收光能而被激发，所产生的发光称为光致发光； 如果分子是由化学反应的化学能或由生物体释放出来的能量所激发，其发光分别称为化学发光或生物发光。 按分子的激发态类型来分类 分子发光的类型 分子荧光（molecular fluorescence） 分子磷光（phosphorescence ) 化学发光（chemiluminescence） 荧光：电子能量的转移不涉及电子自旋的改变，寿命较短，一般小于10-5s， 发射磷光时伴随电子自旋改变，并且在辐射停止几秒或更长一段时间后，仍能检测到磷光。 光致发光所发射的波长较激发它们所用的辐射波长要长。 化学发光：基于在化学反应过程中生成了能发射光谱的激发态物质。 以分子发光作为检测手段的分析方法称为分子发光分析法。 分子发光分析法的特点 分子发光分析法的特点： 灵敏度高，检测限通常比吸收光谱法低 1～3 个数量级，可以达到 ng·mL-1 级。 选择性比较高。 试样量小，操作简便，工作曲线的动态线性范围宽。 光纤传感器、生物医学、药学和环境科学应用广泛。 分子荧光与磷光光谱分析法 基本原理 荧光、磷光分析仪器 荧光、磷光分析法的应用 基本原理 荧光、磷光产生的机理 荧光、磷光与分子结构的关系 影响分子发光的环境因素 荧光、磷光的猝灭 激发光谱和发射光谱 荧光（磷光）强度与溶液浓度的关系 荧光和磷光的产生的机理 处于分子基态单重态的一个电子被激发时，通常跃迁至第一激发单重态的能级轨道上，也可能跃迁至更高的单重态上。 在单重激发态中，电子的自旋方向仍然和处于基态轨道的电子配对，而在三重激发态中，两个电子平行自旋。 单重态分子具有抗磁性，三重态分子具有顺磁性。 室温下大多数分子处在基态的最低振动能级，当其吸收了和它所具有的特征频率相一致的电磁辐射后，可以跃迁至第一（或第二）激发单重态中各个不同振动能级和各个不同的转动能级，产生对光的吸收。 荧光和磷光的产生的机理 通过无辐射跃迁，它们急剧降落至第一激发单重态的最低振动能级后，再回到某基态振动能级时，以光的形式弛豫，所发出的光称为荧光。 荧光的产生是由第一电子激发态的最低振动能级开始，而与荧光分子被激发至哪一个能级无关，因此荧光光谱的形状和激发光的波长无关。 非辐射跃迁 振动弛豫：分子将多余的振动能量传递给介质而衰变到同一电子能级的最低振动能级的过程。 内转化：相同多重态的两个电子态间的非辐射跃迁过程。 系间窜越：不同多重态的两个电子态间的非辐射跃迁过程。 洪特（Hund）规则：在不同轨道上含有两个自旋相同电子的分子能量低于在同一轨道上有着两个自旋相反电子的分子能量。 在同样的分子轨道上，处于三重态分子的能量低于相应单重态分子。 由第一激发单重态的最低振动能级，有可能通过系间窜跃跃迁至第一激发三重态，再经过振动弛豫，转至其最低振动能级。由此激发态跃迁回至基态时，便发射磷光。 某些分子在跃迁至三重态后，通过热激活有可能再回到第一电子激发态的各个振动能级，然后再由第一电子激发态的最低振动能级降落至基态而发射荧光，这种荧光称为延迟荧光。 荧光、磷光与分子结构的关系 荧光、磷光寿命和量子产率 荧光、磷光与有机化合物结构的关系 无机化合物的荧光 荧光、磷光寿命和量子产率 荧光寿命（τf ）：荧光分子处于 S1 激发态的平均寿命。 τf = 1/（k f +∑K） k f 表示荧光发射过程的速率常数， ∑K 表示各种分子内的非辐射衰变过程的速率常数的总和。 荧光、磷光寿命和量子产率 磷光寿命（τp）：磷光分子处于 T1 激发态的平均寿命。 荧光、磷光强度的衰变遵循以下方程式： ln I0－ ln It ＝t /τ 荧光、磷光寿命和量子产率 荧光量子产率（φf）：荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。 荧光量子产率也叫荧光效率 在产生荧光的过程中，涉及到许多辐射和无