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课时1 DNA的粗提取与鉴定
一、实验目的:
初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。[来
二、实验原理:
1.DNA的溶解性:
思考题1:DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点?对此有什么应用?
思考题2:利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开?
2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性:蛋白酶能水解 ,但对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受 ℃的高温,而DNA在 ℃以上才会变性。 能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。
3.细胞在 中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂,据此可得到含有核DNA的溶液。[
4.DNA的鉴定:
思考题3:依据什么原理来鉴定DNA?
三、实验材料:鸡血细胞液
思考题4:生活在牧区的人们,采集牛、羊和马血比较方便,他们能否选用牛、羊、马血做实验材料?为什么?
四、实验步骤:
1.制备鸡血细胞液:在鸡血中加入质量浓度为0.1g/mL的 溶液,离心处理
2.提取鸡血细胞的细胞核物质:向鸡血细胞液中加入蒸馏水,搅拌、过滤;[
思考题5:加入蒸馏水的目的是什么?为什么能达到此目的?
3.溶解细胞核内的DNA:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态;
4.析出含DNA的黏稠物:加入蒸馏水,用玻璃棒搅拌;
思考题6:此时加入蒸馏水的目的是什么?
5.滤取含DNA的黏稠物:过滤;
思考题7:这次过滤与上次过滤的目的一样吗?为什么?[
6.将DNA的黏稠物再溶解:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态;
7.过滤含有DNA的氯化钠溶液:过滤;
思考题8:这一步骤的目的是什么?
思考题9:为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?
8.提取含杂质较少的DNA:加入冷却的95%的酒精,搅拌;
思考题10:这一步骤的目的是什么?
思考题11:为什么加入的酒精需要冷却的?
9.DNA的鉴定:取两支试管,各加入0.015mol/L的氯化钠溶液5mL,一支加入提取的DNA,两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。
思考题12:为什么要设置对照组?实验中能观察到什么现象?
五、课堂练习:
1.为了便于提取鸡血细胞中的DNA,下列所采取的措施中,最恰当的是:向经抗凝剂处理的鸡血液加入 ( )
A.蒸馏水 B.ATP
C.0.3g/mL的蔗糖溶液 D.二氧化碳[来
2.下列不适宜作为DNA提取的实验材料是 ( )
A.鸡血细胞 B.蛙的红细胞 C.人的成熟红细胞 D.菜花
3.用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后,还要用酒精处理,可以得到较纯化
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