229145339101蛋白质与氨基酸.pptVIP

蛋白质与氨基酸 主要介绍氨基酸、肽和蛋白质的结构、性质、功能以及蛋白质的结构与功能的关系。还介绍了一些基本技术如氨基酸的分离、纯化，多肽的人工合成，蛋白质的分离、纯化、鉴定等。 （1）逆流分溶（逆流分配） （2）纸层析 单向纸层析图 Rf值 双向纸层析图 （3）聚酰胺薄膜层析 （4）薄层层析 2．离子交换层析法 原理：分离氨基酸时，用离子交换树脂作为支持物，利用离子交换树脂上的活性基团与溶液中的离子进行交换反应，由于各种离子交换能力不同，与树脂结合的牢固程度就不同，在洗脱过程中，各种离子以不同的速度移动，从而达到分离的目的。 这种分离主要与各种离子所带电荷有关，在电荷相同时，与极性，非极性有关。 离子交换树脂： 化学本质：是一种人工合成的聚苯乙烯一苯二乙烯组成的具有网状结构的高分子聚合物。 外观： 阳离子交换树脂：活性基团是酸性的，如磺酸基-SO3H （强酸型），羧基-COOH（弱酸型） 阴离子交换树脂：活性基团是碱性的，如季胺基- N+(CH3)3OH- 茚三酮显色：仪器灵敏度10-9mol OPA（邻苯二甲醛），荧光胺： 灵敏度10-12mol。 3．高效液相层析（high performance liguid chromatography, HPLC） HPLC的特点: （1）反相层析（reverse phase chromatography） （2）离子交换层析 （3）凝胶过滤 HPLC可使氨基酸分析的灵敏度达到10-12mol水平。 HPLC： （六）氨基酸的制备 1．蛋白质水解 （1）酸水解 （2）碱水解 （3）酶水解 2．人工合成 3．微生物发酵 三、肽（peptide） （一）肽的结构和命名 肽是由两个或两个以上的氨基酸通过肽键连接而形成的化合物。 Peptide bond 二肽 三肽 四肽 二肽→ +肽称寡肽（oligopeptide） 多肽（Polypeptide） 氨基酸之间通过肽键连接形成的链称肽链。 N端 氨基酸残基 氨基酸残基 C端 肽链书写方式：N端→C端 肽链有链状、环状和分支状。 命名：根据氨基酸组成，由N端→C端命名 丙氨酰甘氨酰亮氨酸 Ala－Gly－Leu (or Ala?Gly?Leu) （二）肽的理化性质 1．两性解离与等电点 肽与氨基酸一样具有酸、碱性质，它的解离主要取决于肽链的末端氨基、末端羧基和侧链R基。 由于肽中N端自由氨基和C端自由羧基之间的距离比氨基酸中的大，因此它们之间的静电引力较弱。肽中C端-COOH的pK略大于氨基酸中的pK值，pK1↑。N端-NH+3的pK略小于氨基酸中的pK值，pK2↓。R基的pK变化不大。 肽的等电点：肽所带净电荷为“零”时，溶液的pH值。 例：已知末端α-COOH，pK3.6，末端α-NH3+pK8.0 ε-NH+3pK10.6。 计算Ala-Ala-Lys-Ala的等电点。 pI=(8.0＋10.6) /2 =9.3 2．肽的化学性质 肽的化学性质与氨基酸相似，如两性解离、等电点等，但肽有与氨基酸不同的特殊反应 （1）双缩脲反应 （2）肽键的紫外吸收 210～230nm 双缩脲 ＋ 碱性CuSO4溶液 紫色 （三）天然存在的某些活性肽 1．肌肽和鹅肌肽 肌肽（carnosine）:β-Ala-His 鹅肌肽（anserine）：β-Ala-1-Me-His 2．谷胱甘肽(glutathione,GSH) 3．多肽抗菌素 4．多肽激素 5．神经肽 甲硫氨酸脑啡肽 Tyr–Gly–Gly–phe- Met 亮氨酸脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-phe-Leu 功能：镇痛 如脑啡肽 (enkephalin) （四）肽的人工合成 1．概况 20世纪初 E. Fischer：以氨基酸为原料合成了一个十八肽。 1932年 M.Bergman: Cbz 1953年 美国 Du.Vigneaud：生物活性的催产素 1965年 中国：生物活性的牛胰岛素 1962年 美国Merrifield：固相合成法 2．合成方法 （1）液相合成法 ① 用缩合剂的方法 氨基保护基Y：Cbz、Boc、Tos 羧基保护基Z：甲酯（OMe）CH3O- 乙酯（OEt）C2H5O- 苄酯（OBzl） 叔丁酯（OBut） 4．等电点的计算 中性氨基酸：以Gly为例 K1= [Gly±] [H+] [Gly+] K2=