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RAPD标记和基因芯片技术在中医药领域的应用 吴苏亚 （南京中医药大学，08药学一班，042008118） 摘要：当今，以分子生物学理论为基础，以基因工程为主导的生物技术正以其巨大的活力推动着生命各学科的发展。近年来分子生物学理论和技术在中医药研究领域中也发挥着重要作用。本文从RAPD标记技术和基因芯片技术两个方面探讨如何将这一新兴技术结合到古老的中医药的研究中去，为中医药客观化、定量化、标准化研究提供便利。 关键词:RAPA标记；基因芯片；中医药 RAPD markers and gene chip technology in the field of application of Traditional Chinese Medicine Wu Suya Abstract: Today, the basis of molecular biology to genetic engineering biotechnology is dominated by its huge energy to promote the development of various disciplines of life.In recent years, theory and techniques of molecular biology research in the field of Chinese medicine also plays an important role.?In this paper, RAPD markers and gene chip technology are two aspects of how this emerging technology into the ancient Chinese medicine to the study, a Chinese medicine objective, quantitative, standardized research facilities. Key words: RAPA marker; gene chip; traditional Chinese medicine 分子生物学是从分子水平来研究生命现象的一门基础学科。20世纪40年代由W.Astbury首先提出分子生物学一词,50年代 J.D.Watson和F.Crick关于DNA双螺旋结构的发现,60年J.Monod和F.Jacob有关基因调控的操纵子学说的提出,以及70年代初期DNA限制性内切酶的问世和DNA体外重组技术的形成,推动了分子生物学的飞速发展。 随着科学的不断发展,分子生物学与中医药领域互相渗透越来越深入。目前,多种分子生物学技术已被引进中医药研究领域,例如核酸探针和分子杂交技术、聚合酶链反应(PCR)、杂交瘤和单克隆抗体技术、基因工程和转基因动植物技术等。其中RAPD标记技术和基因芯片技术在中医药领域的研究中取得不少成就。 RAPA标记技术 1.1 RAPA标记技术的基本原理 RAPD技术是建立在PCR技术的基础上,用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基序列的寡核苷酸单链(一般为10 bp)作为引物,对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。 模板DNA经90~94变性解链后在较低温度(36~37℃)下退火,这时形成的单链模板会有许多位点与引物互补配对,在72℃下,通过链延伸,形成双链结构,完成DNA合成。重复上述过程,即可产生片段大小不等的扩增产物,通过电泳分离和显色便可得到许多不同的条带,从中筛选出特征性条带。扩增产物片段的多态性反映了基因组DNA的多态性。如果基因组在这些区域内发生DNA 片段插入、缺失或碱基突变就可能导致这些特定结合位点的分布发生相应的变化,而使PCR产物增加、缺少或发生相对分子质量的改变。因此,通过对PCR产物的检测即可测出基因组DNA在这些区域的多态性。 1.2RAPD标记技术在中药领域的应用 种属分类及亲缘关系的鉴别 在药材的种属分类及亲缘关系上，因遗传背景复杂，亲缘关系不清，传统的分类方法不能提供种类的遗传信息，学者们一直以来存在着分歧，而RAPD标记技术对解决这些分歧点提供了可靠的方法。比如，运用RAPD技术刻划了国产姜黄属(Curcuma)药用植物的遗传背景差异，并结合经典分类和异地栽培观察和聚类分析，初步澄清了姜黄属植物的一些分类学争议，从DNA分子水平上为姜黄属植物分类与中药鉴定提供了参考依据。 药材道地性研究 中药十分讲究道地性,道地药材是传统公认来源于特定产区的名优正品药材。道地药材从生物学内涵讲是居群,其一个重要特征是遗传特征,应看成是一个具有共同基因库的由交配和亲缘关系联系起来的同一物种的个体群,因此DNA分子标记技术可以用于道地药材的鉴别和