不同洗发水对大蒜根部细胞染色体的毒害作用.docVIP

不同洗发水对大蒜根部细胞染色体的毒害作用 概述 微核（micronuclei）简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞竟辐射或化学药物的作用产生的。微核产生的最主要的原因是断裂作用与非整倍体化作用。一般认为，前者产生的微核由无着丝粒断片构成，后者产生的微核由整条染色体构成。但几乎所有诱发微核的因素都兼有两种作用。如经典断裂剂X射线同时具有微弱的非整倍体化作用，一些明确非整倍体剂也有断裂作用。研究表明，微核的形成有两条途径:一是细胞G1期产生的染色体断片因没有着丝粒在细胞有丝分裂后期不能被纺锤体牵引到细胞两极，故在细胞进入间期时，它们被排斥在细胞的主核之外，形成微核:二是一些染色体因种种原因不能按时达到细胞的中央赤道板，或到达了细胞中央赤道板，但不能很好分离，或纺锤体的功能受到损伤，致使染色体不能被纺锤体牵引到细胞两极。也有人认为，细胞凋亡能引起细胞内C a2十浓度升高进而激活DNA内切酶，使其活性增加，产生较多的DNA断片。细胞组分不正常(如缺乏叶酸)也可在细胞中形成微核。微核试验最大的优点是经济、简单、快速。微核实验已经发展到了第四阶段(19 97年后)，而第三阶段（1992一199 6年）已经到了微核试验的成熟期。经过10余年的应用和发展，微核试验已在我国预防医学、卫生检验、毒理学、环境科学等多个领域得到广泛普及，研究进入一个高潮。 实验目的 1掌握植物根尖微核技术 2检测、比较洗发水对遗传物质的毒害并分析植物根尖检测洗发水的安全性状况 实验原理 微核是染色体畸变的一种表现形式，为有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片段，在间期细胞的细胞质中形成的一个或多个圆形或杏仁状结构，通过一定制备方法，可以在间期细胞中进行观察计数。 实验材料、器具、试剂 材料:大蒜（根部） 器具：显微镜、手动计数器、镊子 、载玻片、烧杯、瓷盘 试剂：6mol/L盐酸，甲醇，冰醋酸，改良苯酚品红，飘柔，海飞丝， 五．实验步骤 1、浸种催芽： 25oC水浸泡24小时 ，25oC催芽2-3天。 2、洗发水稀释及处理大蒜根部： 选取根尖发育好的种子，根尖浸入待测液（飘柔，海飞丝，）处理6 小时； 将每种洗涤用品分别进行25、50、100、200倍的稀释，选取根尖发育好的种子，根尖浸入不同浓度的洗发水处理6小时，每种洗发水重复三组。 3、恢复培养： 用水浸洗种子三次，每次2-3分钟，25 oC恢复培养24小时。 4、根尖细胞固定： 切下1cm长的幼根，用固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）固定24小时。 5、酸解： 蒸馏水浸洗幼根，吸干水，加6mol/l盐酸室温酸解10分钟。 6、染色： 吸去盐酸，蒸馏水洗3次，置于载玻片上，截下1-2mm长的根尖，滴染液染色5-8分钟。 7、压片与镜检 8. 每个样品观察3～4个根尖。每个根尖至少统计1000个细胞，按以下的标准鉴定微核。 微核鉴定标准： 1. 微核染色体的结构和颜色深浅与主核相似或稍浅 2. 在显微镜下转动微调时，微核与主核处于同一水平面。 3. 呈圆形或卵圆形、形态完整、界限清楚，包含于胞浆中， 4. 直径小于主核的1/5-1/3，并与主核不相连。 注意：被计数的细胞应有清晰的细胞核和胞浆，不重叠，死亡和降解的细胞（核缩、核碎、核溶）被排除在外。无核细胞也被除外。 结果记录 组别 浓度梯度 平均微核率(FMN，‰) 蒸馏水 NaN3 4mg/L 16mg/L 64mg/L 256mg/L 海飞丝 稀释1/200 稀释1/100 稀释1/50 稀释1/25 飘柔 稀释1/200 稀释1/100 稀释1/50 稀释1/25 力士 稀释1/200 稀释1/100 稀释1/50 稀释1/25 七．预期实验结果 洗发水能使蚕豆根尖细胞的微核率显著上升，并且随着处理液的浓度上升，微核率也相应增大，表明其具有较强的诱变效应。所以洗发水属于污染物，它的安全性状况存在问题。 参考文献 [1]王淑,张江丽,高永闯,刘爱华,张志达,李亮.洗发水浓度对蚕豆根尖细胞遗传毒性的研究[J].安徽农业科学,2009 (24): 11595-11596 +11604. [2]张江丽,王淑敏,高永闯,刘爱华,张志达,焦彩荣.洗发水对蚕豆根尖细胞遗传毒性的研究[J].环境与健康杂志,2009,(9):812-814 [3]乐知,王沁.应用蚕豆根尖微核技术检测洗发水的安全性状况[J].大理学院学报,2005,(01):37-39 [4]王爽,诸葛坚,余应年.微核与微核试验在遗传毒理学中的应用[J].癌变.畸变.突变,2000