1-细胞色素C的制备和含量测定.docVIP

细胞色素C的制备和含量测定 摘要：本实验以新鲜动物心脏为原材料，进行了细胞色素C的制备和含量测定。细胞色素C易溶于水，在酸性溶液中溶解度更大，故可用酸性水溶液提取，利用还原型细胞色素C水溶液在波长520nm有最大吸收值的特征，用分光光度法测定其质量浓度并计算出粗制品的总量。 关键词：细胞色素C；制备；含量；测定 引言： 细胞色素C包括多种能够传递电子的含铁蛋白质总称。广泛存在于各种动植物组织和微生物中。它是呼吸链中极重要的电子传递体，细胞色素C（cytochrome c，CytC）只是细胞色素的一种。它在呼吸链上位于细胞色素还原酶和细胞色素氧化酶之间。线粒体中的细胞色素绝大部分与内膜紧密结合，仅有细胞色素C结合轻松，较易被分离纯化。细胞色素C为含铁卟啉的结合蛋白质，每个细胞色素C分子含有一个血红素和一条多肽链。分子质量约为13000，蛋白质部分由104个左右的氨基酸残基组成，其中赖氨酸含量较高，等电点10.2-10.8，含铁量0.37-0.43%。它易溶于水，在酸性溶液中溶解度更大，故可用酸性水溶液提取。本实验以新鲜动物心脏为材料提取制备和纯化细胞色素C，得到其粗品溶液，其中是细胞色素C氧化型和还原型混合物，加入少量联二亚硫酸钠，使混合物中的氧化型转变为还原型，利用还原型细胞色素C水溶液在波长520nm有最大吸收值的特征，用分光光度法测定其质量浓度（mg/ml），并计算出粗制品的