心肌肌钙蛋白I异常病人血清结缔组织生长因子表达的研究_医学论文.docVIP

心肌肌钙蛋白I异常病人血清结缔组织生长因子表达的研究_医学论文 心肌肌钙蛋白I异常病人血清结缔组织生长因子表达的研究_医学论文 作者：赵桂琴，吴国球，刘乃丰 【摘要】 目的:检测心肌肌钙蛋白I（cTn I）异常病人血清中结缔组织生长因子（CTGF）水平的变化，探讨CTGF在心肌损伤病人血清中表达的意义。方法:化学发光法检测血清中cTn I水平，并根据cTn I水平分组；利用生物素亲和素EIA分析法检测各组病人血清中CTGF水平。结果:80例病人血清标本按cTn I水平分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3组，CTGF平均水平依次为（13.04±6）、（21.67±8.35）及（35.06±24.12）ng·ml－1。其中，Ⅱ、Ⅲ组血清CTGF水平明显高于正常对照组（均0.05），Ⅰ组与正常对照组比较差异不显著（Pgt0.05），Ⅱ、Ⅲ组与Ⅰ组比较差异显著（均0.05），Ⅱ组与Ⅲ组比较差异显著（0.05）。结论:CTGF在心肌损伤以及心肌梗死后表达上调，可能与心肌纤维化关系密切。 【关键词】 心肌肌钙蛋白I；结缔组织生长因子；心肌损伤；心肌梗死；心肌纤维化 结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）是近来发现的一种重要的细胞因子，主要由内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞等合成分泌，成年哺乳动物心、脑、肾、肺、肝以及胎盘中均有表达，它与动脉粥样硬化，心、肝、肺、肾等器官的纤维化以及创伤修复密切相关[1。人心肌肌钙蛋白（cardiac troponin，cTn）包括C、T、I 3个亚单位，其中I亚单位（cTn I）在心肌损伤后4～6h释放入血，14～36h达到峰值，是一个十分敏感的特异性心肌损伤标志物，在诊断急性心肌梗死（简称心梗）、判断梗死面积、评价容栓效果等方面具有重要意义。本研究调查不同cTn I水平病人血清中CTGF水平的变化，探索其在心梗后心肌纤维化中的意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料CTGF单克隆抗体、多克隆抗体及CTGF标准品（作者所在实验室制备），水溶性生物素(Sulfo、亲和素(Avidin)和Biotin公司，美国)，化学发光cTn I检测试剂盒(Beckman公司,美国)，高吸附96孔板(Biomat，上海晶美公司),全自动洗板机(Bio公司，美国)，全自动酶联仪(ALISEI，意大利)，全自动化学发光仪(Access，美国)。80例病人血清标本来自东南大学附属中大医院临床检验中心，10例正常人血清标本来自东南大学附属中大医院体检中心。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 cTn I的检测及分组所有血清标本采用双盲方式根据cTn I检测试剂盒、全自动化学发光仪操作说明及规程检测cTn I水平。并根据试剂盒诊断标准和ACC/AHA对于心梗的诊断标准，将病人分成排除心肌损伤组（Ⅰ组）、心肌损伤组(未发生心梗，Ⅱ组）及心梗组（Ⅲ组）3组。10例正常人血清标本设为正常对照组。 　　1.2.2 CTGF的检测 　　 包被 CTGF单抗用0.05mol·L－1 NaHCO3缓冲液（pH 9.6）配制成2μg·ml－1，以100μl·孔－1包被96孔板酶标板，4℃过夜。用含0.5%Tween－1的PBS(pH 7.4)洗涤3次后加入150μl含2%酪蛋白的0.1mol·L－1 PBS(pH 7.4),37℃孵育2h，洗涤5次后4℃密封保存。 　　 生物素标记CTGF多克隆抗体 取10mg CTGF多克隆抗体，用1ml0.1mol·L－1 PBS(pH 7.4)溶解，加入16μl(28mg·ml－1)水溶性生物素，混匀，室温放置30min后，将混合物转入透析袋，置于1 L含0.01mol·L－1PBS(pH 7.4)的透析液中，4℃过夜，除去未反应的生物素。 　　 ABC复合物的制备 取5ml0.1mol·L－1的PBS(pH 7.4)，加入45μl Avidin和45μl Biotin，混匀，室温反应30min。 　　 检测 取50μl待测样品及系列稀释的CTGF标准品（0~1 000ng·ml－1）样品加入已包被CTGF单抗的酶标板中，37℃ 1h，洗板6次后加入1∶300 稀释的Biotin多抗，37℃孵育1h，洗板6次后各孔加入50μl ABC酶复合物，室温30min后加入显色液A和B各50μl，室温20min，加入50μl 2mol·L－1 H2SO4终止反应，在全自动酶标仪上测定A450值。根据标准曲线计算标本中CTGF的浓度。1.3 统计学处理结果用x-±s表示，采用单变量SNK法q检验，0.05视为有统计学意义。 　　2 结果 　　80例病人血清标本CTGF平均水平为（25.79±19.71）ng·ml－1,Ⅰ组(n=15)、Ⅱ组(n=28)、Ⅲ组(n=37)和