抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定_药学论文.docVIP

抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定_药学论文 抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定_药学论文 作者：林月霞，段涛，董斌，袁茵，田素娟 【摘要】 目的 对抗氯霉素单克隆抗体4D10进行纯化与特性鉴定，以获得可用于检测氯霉素残留试剂盒的单克隆抗体。方法 用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体，用间接酶联免疫吸附试验、竞争ELISA等方法测定抗体效价、特异性、敏感性与亲和性以及抗体与其它氯霉素结构类似物的交叉反应率。结果 纯化后抗体的纯度高达95%;对抗体进行相关性质的鉴定得出：4D10效价为1∶2.56×105，其亲和力常数可达2×108M-1，该抗体与CAPBSA，CAPOVA有反应，与BSA、OVA无反应;与氯霉素琥珀酸钠、氯霉素反应，而与其它氯霉素结构类似物无交叉反应。结论 抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、特异性强、亲和力高，可利用该抗体制备检测氯霉素残留的ELISA试剂盒。 【关键词】 氯霉素;单克隆抗体;亲和常数 　　(School of Life Sciences and Biopharmaceutics，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou,Guangdong 510006,China)Abstract:Objective To prepare and to characterize the monoclonal antibody (McAb) against chloramphenicol (CAP). The McAb was used for the kit of detecting chloramphenicol residues.Methods Twostep ammonium sulfate precipitation and protein G purification by affinity chromatography were used to purify McAb. Competitive inhibition enzyme linked immunosorbent assay (ciELISA) was used to determine the antibody titer and competitive ELISA was used to determine specificity,sensitivity,affinity,and the crossreactivity between the antibody and chloramphenicol analogs.Results The purity of the antibody was 95%,the titer of McAb 4D10 was 1∶2.56×105,its affinity was 2×108 M-1,and it had no reactivity with BSA,OVA and the chloramphenicol analog.Conclusion McAb 4D10 had high titer,high specificity,and high affinity,and could be used to develop CAP immunoassay kits for detection of CAP residues. 　　Key words:chloramphenicol (CAP); monoclonal antibody; affinity 　　氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一种针对革兰阳性和阴性菌以及其他微生物的广谱抗生素，被广泛运用于畜牧业。然而，氯霉素具有较强的毒副作用，尤其是严重的再生障碍性贫血，且在动物中消除速度慢，残留的氯霉素可通过食物链传给人类，对人类的健康造成危害。动物食品中的氯霉素残留对人类的健康构成了巨大威胁，这一问题已引起国际组织和许多国家和地区的高度重视，包括欧盟在内的许多国家已禁止其在食品生产、动物中使用[1]。 　　氯霉素残留ELISA检测法具有灵敏度高、特异性强、分析成本低以及样品前处理简单等优点，是目前较理想的残留筛选分析方法之一[2]。合格的氯霉素(CAP)单克隆抗体是CAP残留ELISA检测法建立的前提，本研究对本室制备保存的抗氯霉素单克隆抗体4D10进行纯化，并对该单抗的相关性质进行鉴定。有关4D10单抗的一般性质如相对分子质量、纯度、抗体亚类、染色体、效价等已在另文发表[3]，本文主要对该单抗的敏感性、特异性和亲和力等方面的性质进行鉴定，为制备氯霉素残留ELISA试剂盒提供高效、优质的原材料。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　抗氯霉素单克隆抗体4D10、