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基因工程 问题探讨： 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ⒈主要来源： 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 2、作用特点： 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 3、限制酶识别序列 　 　 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 4.作用结果： 二、“分子缝合针” —— DNA连接酶 　 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点 　　⑵对受体细胞无害 　　⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　⑷有某些标记基因，便于筛选 ⒉常用运载体： 　 ⑴细菌的质粒 　 ⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒 小结 3、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） A .同种限制酶 B. 两种限制酶 C .同种连接酶 D. 两种连接酶 【答案】　(1)DNA　能够自我复制　具有遗传效应 (2) (3)标记基因　供重组DNA的鉴定和选择　(4)C 基因工程 的工具 限制 酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 产生黏末端或平末端 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工 具 具备的 条件 能在宿主细胞中自我复制 并稳定存在 具一种至多种限制酶切点 具标记基因 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 1、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是( ) ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A、①③⑤⑦ B、②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ 答案：C 2、在受体细胞中能检测出目的基因是因为( ) A、目的基因上有标记 B、质粒具有某些标记基因 C、重组质粒能够复制 D．以上都不正确 答案：B * * 专题1 基因工程，又叫DNA重组技术。是指按照人们的愿望，在DNA分子水平上进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 一、基因工程的概念 基因工程的概念 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的新生物类型和生物产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花有抗虫特性 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子手术刀”— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”— DNA连接酶 “分子运输车”— 基因进入受体细胞的载体 原核生物 限制酶就是细菌的一种防御性工具，切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 2、作用特点： 识别特定核苷酸序列,切断两个 核苷酸之间的磷酸二酯键。 具有特异性。一种限制酶一般只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 1、主要来源：原核生物 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ SmaⅠ 平末端　　　平末端 4.限制酶的作用结果： EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 4.限制酶的作用结果： EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 重复演示 产生黏性末端或平末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 限制酶是一种核酸切割酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。如图为