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生物药物的制备技术 第三节 酶类药物的工业生产 酶在临床上用于疾病治疗已有悠久的历史。由于酶是生理、生化过程的重要参与者，酶量的多少和活性的高低，直接关系到人的健康水平。因此，用酶治疗疾病有着十分广阔的前景。 酶类药物获取途径有两种： 动植物和微生物直接提取 微生物发酵生产 酶的制备一般包括四个基本步骤： 预处理 提取 纯化 结晶或制剂 （一）生物材料的预处理 胞内酶要通过破碎细胞把酶释放，再进行抽提 酶类提取采用的常用细胞破碎方法有： 机械法：利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎 物理法：利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎 化学法：指利用盐、碱、表面活性剂、ＥＤＴ 　　　　　Ａ甲醛、丙酮等有机溶剂作用于细胞　 　　　　　膜，使细胞膜的结构遭到破坏或透性　 　　　　　发生改变 酶解法：指选用合适的酶，使细胞壁遭到破 　　　　　坏，进而在低渗溶液中将原生质体破碎 冻融法：反复冷冻与融化交替使细胞破碎 　　　　　空气干燥法 干燥法　真空干燥法 　　　　　冷冻干燥法 （二）酶的提取 酶的提取是指在一定条件下，用适当的溶剂处理细胞破碎后的含酶原料，使酶充分地溶解到提取液中的过程。 提取方法：水溶解法、有机溶剂法、表面活性剂法 为了提高酶的提取率和防止酶提取后变性失活，提取过程中必须注意保持适宜的温度和pH，并且添加适量的保护剂。 水溶液法：常用稀盐溶液或缓冲溶液提取。为了提高酶的提取率和防止酶提取后变性失活，提取过程中必须注意保持适宜的温度和pH，并且添加适量的保护剂。 有机溶剂法：常用有机溶剂是丁醇。 　　　　　　均相法 丁醇提取 　　　　　　二相法 （三）酶的纯化 １、杂质的去处 pH和加热法 蛋白质表面变性法 蛋白质沉淀剂法 选择性变性法 加保护剂热变性法 核酸沉淀剂法 将酶与底物结合 ２、脱盐 （１）透析 （２）凝胶过滤 （四）酶的结晶 １、盐析法 ２、有机溶剂法 （五）酶类药物生产 (自学见书P50） 在酶的提取纯化过程中应该注意∶ [1]、防止酶蛋白变性。低温、快速、不能过度搅拌。全部操作需在低温下进行，一般在 0～5 ℃，用有机溶剂沉淀时，在零下15～20℃下进行。 [2]、在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、 少量β-巯基乙醇。 [3] 、随时测定酶活力和蛋白质含量，以便计算总活力和比活力。 [4]、酶制剂的纯度应与使用目的相适应。 酶在医药学上的应用 一、酶在疾病诊断上的应用 血清酶的测定 二、酶在治疗上的应用 /zs/88544/ * 第一节 蛋白质类药物的工业生产 一、材料的选取 来源：动植物组织、微生物等。 选取原则：富含蛋白质、容易获得和提取、无害 二、蛋白质的提取 胞外蛋白质 溶媒提取 胞内蛋白质 破碎细胞 溶媒提取 超声波、匀浆器等 三、蛋白质的分离纯化 最常用方法 常用NaCl、 硫酸铵等 盐析法 加入不同浓度的中性盐进行蛋白质的分级沉淀。 蛋白质一般不变性。 有机溶剂 沉淀法 常用 乙醇、丙酮 易引起蛋白质变性，宜低温进行操作。 可用于混合蛋白质的分级沉淀。 等电点 沉淀法 选择在pI不 变性的蛋白质 常联合其它方法使用。 根据溶解度分离 根据分子大小和形状分离 半透膜 常用玻璃纸等 透析法 加入不同浓度的中性盐进行蛋白质的分级沉淀。 大分子不可透过半透膜。 超滤法 超滤膜 不同孔径膜 易引起蛋白质变性，宜低温进行操作。 大分子截留小分子滤过。 凝胶 过滤法 分子筛凝胶 葡聚糖凝胶等 常联合其它方法使用。 大分子受阻小，小分子受阻大。 Dialysis Dialysis 透析法 凝胶过滤法 Gel-Filtration Chromatography Gel-Filtration Chromatography 根据电离性质分离 蛋白质所带电荷 种类、数量及 分子大小差异 电泳法 蛋白质分离和分析的常用方法。 醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳等。 离子交换 层析法 不同蛋白质与 离子交换剂结 合力大小不同 可通过改变溶液pH和盐离子强度分离蛋白质。 离子交换纤维素、离子交换凝胶、大孔离子交换树脂等。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） Polyacrylamide Gel Electrophoresis 等电聚焦电泳 Isoelectric Focusing Isoelectric Focusing 离子交换层析法 Ion-Exchange Chromatography 根据配基特异性分离 亲和层析法：根据生物分子间亲和吸附和解离的原理而建立的层析法。 Affinity Chro