人教版基因工程及其应用.ppt

二、基因操作的工具 几种常见育种方法的比较 * * 本节聚焦： 1、什么是基因工程？ 2、基因工程的原理是什么？ 3、基因工程有哪些应用？ 4、转基因食品安全吗？ 能发荧光的热带斑马鱼 普通热带斑马鱼是不发荧光的 转鱼抗寒基因的番茄 转基因鲑鱼 同时具有高产、稳产和抗逆性等优良品质的农作物新品种. 抗虫害的玉米 思考： 1、为什么能把一种生物的基因“嫁接”到另一种生物上？ 2、推测这种“嫁接”怎样能实现？ 3、这种“嫁接”对品种的改良有什么意义？ 你知道为什么能把人的基因“嫁接”到细菌上吗？你能推测出，这种基因的“嫁接”是怎么实现的吗？你能举出一些类似的、与你的生活关系很密切的例子吗？ “嫁接”了人胰岛素基因的工程菌 一、基因工程的概念： 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 原理 基因重组 生物体外 基因/DNA 分子水平 剪切→拼接→导入→表达 产生人类需要的基因产物 提取 培育转基因大肠杆菌的简要过程 你认为上述培育转基因大肠杆菌的关键步骤有哪些？ 普通大肠杆菌 (不能分泌胰岛素) 人体组织细胞 胰岛素基因 大肠杆菌(含胰岛素基因) 转基因大肠杆菌 (能分泌胰岛素) 与运载体DNA结合 导入 培育转基因大肠杆菌的关键步骤 1.ONE 胰岛素基因从人体细胞内提取出来 2.TWO 胰岛素基因与运载体DNA连接 3.THREE 胰岛素基因导入受体(大肠杆菌)细胞 基因的“剪刀” 基因的“针线” 基因的运载体 1、 基因的“剪刀”——限制性核酸内切酶 能够限制异源DNA的侵入并使之失去活性，但对自身DNA无损害。 一种限制酶只能识别一种特 定的核苷酸序列，并在特定的切点 上切割DNA分子——特异性。 作用：裂解磷酸二酯键， 产生两个黏性末端。 黏性末端 例：大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开。 EcoRⅠ 2、基因的“针线” ——DNA连接酶 连接酶的作用： 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 连接的部位： 生成磷酸二酯键 DNA连接酶的作用过程： 3、基因的运载体——质粒或病毒 作用： 将外源基因送入受体细胞。 条件： 能在宿主细胞内复制 并稳定地保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因。 种类： 质粒、噬菌体和动植物病毒。 从细胞中分离出DNA 从大肠杆菌中提取质粒 限制 酶 提取目的基因 限制酶 目的基因与运载体结合 DNA连 接酶 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测 基因工程操作的基本步骤 四个基本步骤： （三）基因工程操作的基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞（借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径） 4）目的基因的检测和鉴定 （三）基因工程操作的基本步骤 目的基因：是人们所需要转移或改造的基因。 直接分离基因:鸟枪法 人工合成基因：化学方法合成、逆转录法 目的基因的提取方法 “鸟枪法”：用限制酶将供体细胞中DNA切成许多片段，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。如许多抗虫基因、抗病毒基因都可以用上述方法。 优点：操作简便 缺点：工作量大，盲目性。 逆转录法：以目的基因转录成的mRNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。 化学合成法：根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，推测结构基因的核苷酸序列，再通过化学合成方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等。 （三）基因工程操作的基本步骤 目的基因与运载体重组 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切割目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 载体--载体 目的基因--载体 目的基因--目的基因 （三）基因操作的基本步骤 目的基因的检测和鉴定 四环素 抗性基因 氨苄青霉 素抗性基因 （三）基因操作的基本步骤 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 受体细胞摄入D