组织培养实验-MS培养基及配制注意事项.docVIP

一、MS培养基母液的配制 母液 成　分 1倍培养基用量 浓缩 倍数 称取量（mg） 母 液 体积（ml） 配制1升培养基吸取量（ml） 编号 种类 1 大量元素 KNO3 1900 10 19000 1000 100 NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4·7H2O 370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2·2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4·4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4·7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 1000 830 1000 1 Na2MoO4·7H2O 0.25 1000 250 CuSO4.5H2O 0.025 1000 25 CoCL2.6H2O 0.025 1000 25 4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5 有机物 甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 25 盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 6 肌醇 100 50 5000 500 10 注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制 按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴 上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。 5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。 A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须 是高纯度的（分析纯）。 B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 二、培养基配制和灭菌 一．养培养基配制程序 (一).母液吸取量的计算 配制培养基的升数 母液吸取量= 母液体积（CC）×—————————— 母液浓缩倍数 （二） 各种母液按顺序编号排列 大量元素；B.CaCl2.2H2O； C.微量元素 ；D.铁盐； E.有机物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。 (三)　配制培养基（1000ml） 琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止. 蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。 各种母液的吸取（培养基1L） 用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml 用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml 移取激素 　将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1N