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分类号： 　　　　　　　　 单位代码：10389 密 级： 学　　号：(S/B) 　 福建农林大学硕士学位论文 学 科 门 类：农学 一级学科名称：二级学科名称： 研 究 方 向：研 究 生：指 导 教 师：教授 刘波研究员 完 成 时 间：二OO年四月 第一章 综述 1 1 苏云金芽孢杆菌研究进展 1 1.1 苏云金芽孢杆菌杀虫机理 1 1.2 苏云金芽孢杆菌增效措施的研究进展 1 2 微生物农药剂型介绍及微胶囊剂型的研究进展 3 2.1 微生物农药剂型介绍 3 2.3微胶囊剂型研究进展 4 3 思路创新 6 第二章 苏云金芽孢杆菌发酵液的絮凝浓缩研究 7 前言 7 1 材料与方法 7 1.1 试验材料 7 Bt LSZ9408由本实验室保存和提供。 7 1.2 Bt的发酵 8 1.3 发酵液的离心过滤 8 1.4发酵液的絮凝浓缩 9 1.5 CCl4两相法提取Bt蛋白质晶体 9 1.6等电点沉淀法提取Bt蛋白质 10 1.7 Bt蛋白质及其晶体的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 10 2 结果与分析 10 2.1 Bt LSZ9408发酵特性 10 2.2 Bt LSZ9408发酵液的离心过滤研究 11 2.3 Bt LSZ9408发酵液的絮凝研究 13 2.4 等电点沉淀法和两相法提取蛋白质纯度比较 15 3 小结与讨论 16 3.1小结 16 3.2讨论 16 第三章 Bt杀虫蛋白肠溶式微胶囊的制备工艺研究 18 前言 18 1材料与方法 18 1.1 供试材料 18 1.2 复相乳液法制备微胶囊工艺 18 1.3复相乳液法制备HPMCP微胶囊不同保护性胶体的选择 18 1.4 HPMCP蛋白质包裹量测定方法的研究 19 1.5明胶作分散质肠溶式微胶囊制备工艺的研究 21 1.6 羧甲基纤维素钠作分散质肠溶式微胶囊制备工艺的研究 22 1.7 HPMCP微胶囊形状观察及释放特性研究 23 2 结果与分析 23 2.1 保护性胶体物质的选择 23 2.2 测定HPMCP微胶囊包裹率方法的确定 24 2.4 明胶作分散质微胶囊制备工艺选择 27 2.5 CMC-Na作分散质微胶囊制备工艺条件 30 2.6 HPMCP微胶囊释放特性研究 31 3 小结与讨论 34 3.1 小结 34 3.2 讨论 35 第四章 Bt杀虫蛋白非肠溶性微胶囊的制备 36 前言 36 1 材料与方法 36 1.1 供试材料 36 1.2复合凝聚法制备Bt杀虫蛋白明胶-阿拉伯胶微胶囊 36 1.3 Bt杀虫蛋白的乙基纤维素微胶囊的制备 36 2 结果与分析 37 2.1明胶-阿拉伯胶微胶囊的形态及溶解释放特性 37 2.2 乙基纤维素微胶囊 37 3 小结与讨论 40 3.1 小结 40 3.2 讨论 40 第六章 总结与展望 42 1 总结 42 2 展望 42 综述 生物农药是指用来防治病、虫、草等有害生物的生物活体及其代谢产物和转基因产物，并可制成商品的生物源制剂．包括细菌、病毒、真菌、线虫、植物、昆虫天敌、农用抗生素、植物生长调节剂和抗病虫草害的转基因植物等（金轶伟，2008）。 1 苏云金芽孢杆菌研究进展 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）是重要的生物农药。1957年苏云金杆菌制剂首次上市销售，目前商品制剂已达100多种，是世界上产量最大，应用最广的微生物杀虫剂邱德文分离的Bt菌种已达70个H血清型83个亚种，Bt制剂产量占所有活体微生物杀虫剂的比例达90%以上朱玮1.1 苏云金芽孢杆菌杀虫机理 Bt的杀虫活性物质包括伴孢晶体、芽孢、α-外毒素、β-外毒素、γ-外毒素、不稳定外毒素及水溶性外毒素等。其中伴孢晶体是Bt杀虫活性的主要来源，也是目前研究较多的Bt杀虫活性物质。一般认为Bt伴孢晶体的杀虫机理是：伴孢晶体被敏感昆虫取食后，在昆虫中肠内溶解为前毒素，再经中肠蛋白酶水解形成具有杀虫活性的毒性肽，毒性肽穿过围食膜，与中肠上皮细胞刷状缘膜的结合，并进一步插入膜内，形成孔洞或离子通道，引起离子渗漏，破坏肠壁上皮细胞，使肠道内溶物渗入血腔，引起败血症，从而造成昆虫全身麻痹而死。芽孢是Bt发酵的主要产物之一，生物产量大。它通过具有类似晶体毒素作用的芽孢衣蛋白和本身萌发时对昆虫肠壁造成的穿透作用，可提高伴孢晶体的杀虫效果。其余Bt杀虫物质也以各自的作用方式起到一定的杀虫作用。1.2 苏云金芽孢杆菌增效措施的研究进展 1.2.1 高效菌株的筛选 通过从土壤、植物叶面等来分离优良的Bt菌株，包括生长、产蛋白晶体、抗紫外等各