添加复合发酵剂对奶牛饲料纯蛋白含量的影响.docVIP

添加复合发酵剂对奶牛饲料纯蛋白含量的影响 烟曲霉和黑曲霉有很强的糖化能力，可以分泌多种酶，酵母可以生产单细胞蛋白及维生素，尤其是B族维生素。在饲料中添加混合发酵剂进行固体发酵有利于饲料中纤维素的糖化及菌体蛋白质的生成，可增加饲料中纯蛋白质和B族维生素含量，提高饲料的消化利用率。本文重点研究了不同条件下混合发酵剂对奶牛饲料中蛋白质含量的影响，旨在为奶牛饲料的预发酵处理技术应用提供帮助。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 菌种酵母菌、黑曲霉和烟曲霉由西北农林科技大学资源环境学院微生物教研室保存。1.1.2 活化菌种培养基①试管斜面培养基：PDA培养基。②土豆汁培养基。1.1.3 发酵培养基向罐头瓶中装7 g小麦秸秆粉和3 g麸皮，混合均匀，按干料：营养液(质量比)＝1：3.5加入35 ml营养液，湿热灭菌。营养液中含大量成分(g/l)：(NH4)2NO3 4.3、MgSO4·7H2O 0.3、KH2PO4 4.3、CaCl2 0.3；微量成分（mg/l）：FeSO4·7H2O 5.0、MnSO4·H2O 1.6、ZnSO4·7H2O 1.4、CoCl2 2.0。1.1.4 复合发酵剂粗酶制剂的制备：将烟曲霉、黑曲霉分别活化后，接入固体培养基中发酵48 h然后低温烘干，再将两种曲霉的发酵产物以1：1的比例混合，混合物的羧甲基纤维素酶(CMCA)活力为99.1 IU/g，滤纸酶(FPA)活力为3.13 IU/g。酵母菌发酵液的制备：将酵母菌种在PDA斜面上活化两次，然后接入土豆汁培养基中，28 ℃摇床培养48 h（菌数10亿/ml）。复合发酵剂的制备：将粗酶制剂与酵母菌发酵液按1：1混合，40 ℃低温烘干即制成复合发酵剂。1.1.5 发酵材料玉米粉：麸皮：奶牛饲料添加剂＝2：2：1的奶牛饲料。1.2 方法1.2.1 奶牛饲料固体发酵试验方案（见表1）1.2.2 发酵产物纯蛋白含量测定将发酵产物在40 ℃烘干，采用硫酸铜沉淀法和凯氏法定氮，以N× 6.25换算成蛋白含量。每处理重复3次。2 结果与讨论2.1 发酵条件对饲料中纯蛋白含量的影响（见表2）从表2可知，随着混合发酵剂用量增加，发酵产物中纯蛋白含量呈曲线变化，先增加，后降低。但各处理之间纯蛋白含量随混合发酵剂用量增加而变化的幅度，因其它条件的差异而不同。在模式Ⅰ中，发酵48 h，无氮处理发酵产物纯蛋白含量随混合发酵剂用量增加变化极大，其纯蛋白含量波动范围在137.1～155.9 g/kg。这种曲线变化趋势可能与菌体在发酵物中的生长状况有关。当混合发酵剂量较少时，纤维素酶活性较低，菌体个数较少，而在适宜的条件下菌体开始大量繁殖，增加了纯蛋白含量。从表2可知，加氮处理的发酵产物中纯蛋白含量大多数高于无氮处理的样品，模式Ⅰ发酵24 h中，除对照和添加复合发酵剂量20 g/kg时无氮处理比有氮处理纯蛋白含量高外，其余有氮处理比无氮处理纯蛋白含量提高3.84％～15.38％，平均提高8.69％；模式Ⅱ发酵24 h的有氮处理比无氮处理纯蛋白含量变化与模式Ⅰ发酵24 h类似。而模式Ⅰ发酵48 h中除对照和添加复合发酵剂量5 g/kg外，其余有氮处理比无氮处理纯蛋白含量降低1.93％～10.29％，平均降低6.17％。发酵时间对饲料中纯蛋白含量的影响较大。模式Ⅱ中，48 h无氮处理和有氮处理纯蛋白含量变化范围分别在151.4～169.3 g/kg和153.2～172.0 g/kg，无氮处理和有氮处理在48 h比24 h纯蛋白含量分别提高0.13％～6.14％和0.06％～8.59％，平均提高3.67％和4.05％。模式Ⅰ无氮处理中除添加复合发酵剂量5 g/kg时48 h比24 h纯蛋白含量低外，其余48 h比24 h处理纯蛋白含量提高0.73％～9.13％，平均提高5.10％；而有氮处理中除对照和添加复合发酵剂量20 g/kg时48 h比24 h纯蛋白含量高外，其余48 h比24 h处理纯蛋白含量降低7.24％～8.69％，平均降低8.20％。模式Ⅱ和模式Ⅰ相比，其纯蛋白含量增幅较高。发酵48 h，模式Ⅱ较模式Ⅰ有氮和无氮处理的纯蛋白含量增加幅度分别为11.74％～28.93％和8.59％～15.38％。在发酵剂用量10 g/kg时，发酵48 h，模式Ⅱ有氮发酵处理较对照纯蛋白的绝对增量为18.8 g/kg，增幅12.27％。因此，奶牛饲料的最适预发酵条件为复合发酵剂量10 g/kg、添加氮素、温度30 ℃、时间48 h、水：料=2.5：3。2.2 奶牛原饲料与奶牛加氮发酵饲料纯蛋白含量（见表3）从表3可知，大多数加氮处理奶牛发酵饲料中纯蛋白质含量高于奶牛原饲料纯蛋白含量。在模式Ⅱ中，发酵48 h发酵产物蛋白质含量较奶牛原饲料增加