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pumch xxl 真菌学鉴定具有一定的挑战性 学习丝状真菌的常规检查 自然界真菌无处不在,是一类极为兴旺的生物,已逐渐成为微生物学科的主流部分 过去被认为“污染菌”菌种,教科书中还没有致病菌描述的条件致病菌,从正常无菌部位,免疫受损病人中分离出 实验室技术人员必须认清该类菌种不断扩大潜在的致病性 想要具备认清并鉴定医学重要真菌的能力,学习形态学和熟悉主要结构的名词,真菌基本结构和分类的规律 真菌的形态学可简单分为霉菌和酵母菌 酵母通常是单细胞的,由母细胞自身的一部分形成的子细胞,无菌丝称酵母型,有假菌丝称类酵母型 霉菌是多细胞的菌丝交织成缠结结构称为菌丝体,有隔或无隔,分枝或不分枝,有色或无色菌丝 真菌的繁殖靠形成的孢子、孢子分为无性或有性两种,无性孢子有两种类形:孢囊孢子和分生孢子 产孢囊孢子的无性孢子归为接合菌亚门:例如:根霉属(Rhizopus)和毛霉属(Mueor) 具有分生孢子是裸生的无性孢子,归为半知菌类,例如:曲霉、青霉、和皮肤真菌 单纯依靠真菌在宿主体内的寄生形态鉴定比较困难,如只能看到菌丝有无分隔,还需选择合适的培养基才能鉴定到种 半知菌是常见医学真菌,其有性特征未知,鉴定主要主要依靠孢子的形态,分生孢子梗和产孢细胞的特点 孢子类型的鉴定对于真菌的属种与判断极为重要 显微镜观察形态学是非常重要的步骤 某些真菌特异性结构是在感染病症是,显微镜直接检查确诊 如:血液和骨髓中荚膜组织胞浆菌 卡氏肺孢子虫菌孢囊的检测 皮炎芽生和粗球孢子菌的直接检测 统计近一年内细菌室肺泡罐洗液 真菌培养156份,阳性标本26例,阳性率21% 烟曲霉5株、曲霉属5株、黑曲霉1株 (占 42%) 青霉菌5株、桔青霉1株 (占23%) 白念株菌5株 (占 19%) 支孢霉属3株 (占 11%) 根霉属1株、链格孢1株、紫色拟青霉1株 9例标本培养和涂片匀阳性(占 35%) 17例标本培养阳性涂片阴性(占 65%) 3例标本培养阴性涂片阳性 直接检查的局限性和潜在的问题,直接检查阴性结果,决不能排除真菌感染 错误的阳性结果也会出现: 如:墨汁染色中溶解的淋巴细胞错误认 为新型隐球菌 胶原纤维被错误认为是病原体 脂肪滴容易与出芽酵母细胞混淆 可疑的发现通常需要多人审查,或用第二种方法来证实 强调:直接检查中一个错误的阳性结果比一个错误的阴性结果危害性更大。 真菌标本中不常见条件致病菌或环境中污染菌的区别 例:根霉的培养阳性结果可能是污染菌也 可能是致病菌 青霉菌属(Aspergillus)或透明丝孢霉和暗色丝孢霉病的病原体 这些报告的准确性与临床起始或延迟抗真菌治疗是至关重要的 真菌室培养阳性率最高的丝状真菌 曲霉菌属:185种,约20种被报道过,其中烟曲霉、黄曲霉是常见的致病菌 可从痰、支气管灌洗液、血、脑脊液、角膜刮出物、外耳道、鼻窦、腹膜液、玻璃体中分离到 直接镜检 对痰、窦道排泄物及气管冲洗液等标本直接镜检可以看到透明分支的菌丝、脓血或痰太粘稠用10%KOH处理后再进行镜检 如果曲霉菌寄生与空气相通的器官中,镜检甚至可以看到曲霉头菌丝有隔,呈二叉型,45℃ 分枝。 毛霉菌目 条件致病性感染,主要诱因是糖尿病性酸中毒,严重烧伤,胃溃疡,血液病,淋巴瘤,血液透析,免疫缺损,长期使用抗生素等 毛霉科中的几个属,如毛霉属、根霉属、犁头霉属,可以引起毛霉菌病 直接镜检 活体组织标本,鼻窦抽吸物,肺支气管冲洗液(离心) 可见菌丝宽大(7-15mm)透明极少分隔,似带状,通常分断裂或扭曲的, 分支呈直角的菌丝 提示:由于空气中常有毛霉孢子、培养时常有污染,如果直接镜检中若见到宽大无分隔菌丝则很有意义,但如果病人有糖尿病或免疫抑制,则培养阳性有意义。 镰刀菌属 感染包括角膜炎,鼻窦炎,心内膜炎,骨髓炎,,脑脓肿,烫伤或坏死皮肤伤口或溃疡 真菌中的形态类型:透明的有隔菌丝 直径:3-6um宽 形态特征:菌丝有隔很难与其它透明菌丝分别,如曲霉菌 马尔内菲霉菌 真菌中的形态类型:酵母型(裂殖) 直径3um 形态特征:裂殖酵母,不是出芽酵母 鉴定:双相真菌 37oC培养呈酵母, 镜下圆形橢圆形长形酵 母样菌, 25oC 侧支分生孢子梗和分生孢子链(帚状分枝) 显示侧支分生孢子梗和分生孢子链的马内菲青霉菌 显示37oC培养呈酵母镜下圆形橢圆形长形酵母样菌体 机会性真菌感染的发病率和病死率急剧上升 提高真菌病诊断水平是临床工作者最大难题之一 真菌工作者既是职
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