第二部分光学分析法.ppt

第三章 紫外—可见分光光度法 一、电磁辐射与电磁波谱 光是一种电磁波，整个电磁波包括： 光子的能量与波长的关系为： 例：计算波长为200 nm的光子的能量 解： 紫外——可见光区光子的能量和波长的关系见下表： 二、定量方法 例如，入射光的强度为100，透射光的强度为35，则T = 0.35或35%。 溶液的透光率愈大，表示它对光的吸收程度愈小；相反，透光率愈小，对光的吸收程度愈大。 实践证明，溶液对光的吸收程度与溶液浓度、液层厚度及入射光波长等因素有关。如果保持入射光不变，则溶液对光的吸收程度只与溶液浓度和液层厚度有关，即 为了方便起见： 吸光度（absorbance） 吸光系数 液层厚度 溶液浓度 当a、c一定时，A∝b Lambert’s law 当a、b一定时，A∝c Beer’s law Lambert-Beer 定律可表述为：在一定条件下，物质的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比，称为光吸收定律，是吸收光谱定量的依据。 Lambert-Beer 定律是均匀、非散射介质对光吸收的基本定律，只有对入射光是单色光才完全适用。 2. 吸收系数 absorptivity a为吸收系数，是指在一定入射光波长下，单位浓度及单位液层厚度时的吸光度。即 一般b的单位为cm，a的单位与c的单位有关。 比吸光系数 specific absorptivity 比吸光系数是指一定波长时，溶液浓度为1%（w/V），厚度为1cm的吸光度，用 表示。 摩尔吸光系数 molar absorptivity 摩尔吸光系数是指一定波长时，溶液浓度c为1 mol/L，液层厚度b为1cm时的吸光度，用?表示。 ?和 不能直接测得，需用已知准确浓度的稀溶液测吸光度计算得到。 解： 例：称取1.00mg维生素B12(M=1355)，配成25.00 ml水溶液，吸收池厚度为0.5cm，在361nm波长下测得吸光度为0.414，计算摩尔吸光系数。 例：用纯氯霉素配制100ml含2.00 mg的溶液，在278nm，用1.00cm的吸收池，测得T=24.3%，求比吸光系数和摩尔吸光系数。 ?与物质的本性、溶剂和入射光的波长有关，即 （1）物质不同， ?不同，是物质的特性常数。 （2）溶剂不同，同一物质的?不同，所以应注明溶剂。 （3）?不同，同一物质的吸收系数也不同，所以吸收系数应注明波长； （4）入射光的纯度：单色光是经单色器色散成波长范围很窄的光。实际上，不管单色器的分辨率有多高，所谓的单色光仍然是有一定的宽度的。例如高锰酸钾溶液的吸收曲线。 如果在AB范围内，?～1700，CD范围内?～2300，EF范围?～2500。因此，还应考虑单色光的纯度，即使用仪器的精确度（光强和色散元件的分辨率。 第三节 紫外—可见分光光度计 紫外—可见分光光度计的类型很多，但其原理基本相似。一般由五部分构成，即光源、单色器、吸收池、检测器、指示器（信号显示装置） 一、分光光度计的主要部件 1. 光源 对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 钨及碘钨灯：340～2500 nm，多用在可见光区； 氢灯和氘灯：160～375 nm，多用在紫外区。 2. 单色器 单色器的用途就是把混合光变成单色光，由入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦元件和出口狭缝组成。常用的色散元件有棱镜和光栅。 棱镜 是利用不同波长的光具有不同的折射率而使复合光分开的。用玻璃和石英制成。 光栅 grating 利用光的衍射和干涉作用使复合光分开。其特点是：色散波长范围宽，可用于紫外、可见、红外等光谱区，分辨率高，色散率基本上不随波长改变而改变，即均匀色散（色散近于线性）。现代仪器多用光栅作色栅元件。 缝狭 缝狭是单色器的组成部分，对单色光的纯度起着非常重要的作用。狭缝有两种表示方法（1）用狭缝的实际宽度表示，以mm为单位，一般为0～2mm，（2）用通过出射狭缝的谱带宽度表示，以nm为单位，如2nm、1nm、0.5nm及0.2nm等。狭缝愈窄，光的单色性愈好，测得的吸收峰愈尖锐，但光强度减弱，测定灵敏度降低。 转动棱镜或光栅，可使光谱移动，使不同波长单色光，从出射狭缝射出。 3. 吸收池 absorption cell 比色皿cuvette 盛放样品溶液的容器，用玻璃或石英制成，两透光面互相平行，具有精确的光程。紫外区用石英、可见区用玻璃。盛放参比的吸收池和盛放样品的吸收池应匹配，即有相同的厚度与透光性。吸收池的光学面应垂直于光束方向。 又如KMnO4溶液呈紫红色，则说明它选