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带核酸碱基侧臂的联吡啶铂配合物的合成 及其与DNA作用研究 张伟滨，毛宗万* (中山大学化学与化学工程学院生物无机与合成化学教育部重点实验室，广州 510275) 摘要 对5,5-二(甲基)-2,2-联吡啶的甲基位进行修饰，分别设计、合成了带有核酸碱基侧臂的四种联吡啶配体，并获得了它们的铂配合物，通过圆二色谱、DNA凝胶电泳实验，初步研究并证明了配合物3、4与DNA的作用方式是非插入方式；配合物3、4对DNA的解旋能力较高，其作用大小顺序依次是：3 4 顺铂；配合物3、4与DNA的结合位点主要是DNA的小沟区。 关键词 抗癌药物 2,2-联吡啶衍生物 铂(II)配合物 核酸碱基 1 前言 癌症是长期困扰人类的难题之一。20世纪60年代，化学界、药学界便开始了对抗癌铂配合物的研究，自1971年顺铂(Cisplatin)作为第一例有效抗癌药物被推荐与临床以来[1-2]，抗癌铂配合物的研究已成为生物无机化学的一个重要课题[3-4]。 目前对于铂(II)类配合物的研究主要在以下两个方面：(1)修饰顺铂上的离去基团，使其具有较高的水溶性、运输性，如第二代顺式铂类配合物卡铂(Carboplatin)[5-6]便是修饰Cl位的成功例子，卡铂以亲水性的1,1-环丁二酸作为离去基团，很好的解决了顺铂水溶性较小的问题，而且螯合环也增强了配合物的稳定性，从而在一定程度上降低了毒副作用，但由于其结构与顺铂极其类似，两种药物有着很高的交叉耐药性。(2)修饰顺铂上的稳定基团，提高其抗癌活性，如第三代顺式铂类配合物奥沙利铂(Oxaliplatin)便是一个较好的例子，它以1,2-环己二胺(DACH)作为稳定基团，它的出现解决了交叉耐药性的问题[7]，奥沙利铂也是第一个上市的抗癌手性铂配合物。还有一些学者研究了反式铂(II)作为抗癌、抗肿瘤药物的可能性[8]，以及多核铂[9]、具有长链结构的铂配合物[10]也是研究的方向之一。 本文对具有平面富电子结构的5,5-二甲基-2,2-联吡啶的甲基位进行修饰，分别设计、合成了带有四种核酸碱基侧臂的联吡啶配体，并获得了它们的铂配合物，通过与DNA作用的多个实验研究了所设计合成的配合物与DNA作用的方式、活性、位点。 2 实验部分 2.1 试剂与设备 5,5-二甲基-2,2-联吡啶、DMAP(分析纯，Sigma-Aldrich公司)；双叔丁醇碳酸酯(Boc2O，97%，AlfaAesar公司)，N-溴代丁二酰亚胺、氯亚铂酸钾(分析纯，上海国药集团)；腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶(99%，上海生工生物工程有限公司)；小牛胸腺DNA(生物试剂，华美生物工程公司)；溴乙锭(化学纯，Fluka公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠(HEPES)、EDTA(Ultra Pure Grade，上海生工生物工程有限公司)；氯化钠、硼酸(分析纯，广州化学试剂厂)；其它溶剂均为未经处理的分析纯商品试剂。 2.2配体的合成 按文献[11]合成配体L1前体N6,N6-Bis-(tert-butoxycarbonyl)adenine(ABoc2)，合成路线如图1。按文献[12]合成配体前体L，配体前体L与对应的核酸碱基反应得到配体L1、L2、L3、L4的合成路线如图2，所有的产品均经过NMR、EA、ESI-MS表征并证实获得目标产物。  图1 配体L1前体的合成 图2 配体L1、L2、L3、L4的合成路线  2.3配合物的合成 合成路线如图3，在三口烧瓶中加入87 mg (0.21 mmol) K2PtCl4、配体0.2 mmol，加入20 ml H2O，在氮气/氩气的保护下，70~80 ℃于暗处反应24 h，所得产物离心分离，水洗两次后再用丙酮洗数次，干燥。产物性状、产率如下：1(R=A)暗黄色，0.111 g，77%；2(R=C)暗黄色，0.106 g，80%；3(R=T)棕黄色，0.107 g，77%；4(R=U)橙黄色，0.112 g，84%。 配合物1、2溶解性极差，基本不溶于任何溶剂，暂时无法获得其质谱、核磁图谱，但元素分析表征获得目标产物。其他的配合物均经过NMR、EA、ESI-MS表征并证实获得目标产物。 图3 配合物的合成方法 2.4 配合物3、4与DNA作用的圆二色谱研究 用HEPES缓冲液(HEPES 20 mM，NaCl 5 mM，pH = 7.2)配制小牛胸腺DNA浓度为50 μM 的DNA工作液。用DMSO溶解配合物3、4，使其浓度为3 mM。DNA工作液中加入20 μL DMSO作为空白样，实验样品分别在DNA工作液中加入20 μL配合物溶液；10 μL 配合物溶液、10 μL DMSO2.5 配合物3、4与DNA作用活性的