实验七抑制剂和pH对酶活性的影响.docVIP

实验 pH对酶活性的影响 一、目的要求了解pH 对酶活性的影响掌握试验pH对酶活性影响的原理及方法二、原理酶的活力受环境的pH 的影响极为显著。通常只在一定的pH范围内才表现它的活性。一种酶活性表现最高时的pH 值为该酶的最适pH，低于或高于最适pH 时，酶的活性渐次降低。不同酶的最适pH不同．本实验以枯草杆菌α—淀粉酶来说明pH对酶活性的影响。三、试剂与器材试剂：l. 0.5 ％可溶性淀扮溶液，新鲜配制2. α—淀粉酶稀释液3. 0.2 M 磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO4·2H2O 35.51克，溶于水，定容至1 00 ml。 4. 0.1M柠檬酸溶液：称取C6H8O7·H2O 21.01克，溶于水中，定容至l000 ml。 5．碘—碘化钾溶液器材：1. 试管及试管架2．恒温水浴锅3．吸管10ml 2 支, 5ml 8 支，2 ml 2 支 4. 白瓷调色板 l 块 四、操作 1．取 8 支试管，编号，用管按下表比例添加0.2 M磷酸氢二钠溶液和0.1 柠檬酸溶液，制备 pH 为 4 .4～7.2 的缓冲液。 试管号码 0.2 M磷酸氢二钠(ml) 0.1 柠檬酸溶液 (ml) pH 1 4.41 5.59 4.4 2 4.93 5.07 4.8 3 5.36 4.64 5.2 4 5.80 4.20 5.6 5 6.32 3.68 6.0 6 6.93 3.07 6.4 7 7.73 2.27 6.8 8 8.70 1.30 7.2 2．取 9 支试管，编号，将上述 8 种缓种液分别吸取 3 ml，分别加入相应号的试管中（第 1～8 号）。第9号试管加 pH 5.6 的缓冲液 3 ml。然后再向各试管添加 0.5 ％可溶性淀粉溶液 2 ml将 9 支试管放入 37 ℃ 恒温水浴中预热 5～10 分钟。 3．向第 9 号试管添加α—淀粉酶稀释液 2ml，摇匀，仍在 37 ℃ 温水浴中保温。 1 分钟后，每隔 15 秒钟自第 9 号试管中取出一滴混合液，置白瓷板空穴中，以碘—碘化钾溶液试之，检验淀粉水解的程度，待结果呈橙黄色时，取出试管记下酶作用的时间（自加入酶液时开始）。注意：掌握第 9 号试管的水解程度是本实验成效的关键。 4. 以上l 分钟的间隔，依次向第 l～ 8 号试管加入。α—淀粉酶稀释液2ml ，摇匀，并仍在 37 ℃ 恒温水浴中保温。然后，按紧 9 号管酶作用的时间，依次将各管取出，并立即加入碘—碘化钾溶液 2 滴，观察各管呈现的颜色，并说明之。思考： 1pH 对酶活性影响的机理 2掌握试验 pH 对酶活性影响的原理及方法 3如果要定量测定 pH 对酶活性影响方案如何设计？ 实验 酶的激活剂和抑制 一、目的要求 1. 了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响 2掌握试验激活剂、抑制剂对酶活性影响的原理与方法 二、原理 酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶作用的需要量很少，常有特异性。 本实验以唾液淀粉酶为例，说明氯离子对该酶的激活作用以及铜离子对该酶的抑制作用。三、试剂与器材试剂：l. 0.5 %可溶性淀粉溶液，新鲜配制。2. 1%NaCl 溶液。3. 0.5% CuSO4·5H2O溶液。4. 唾液淀粉酶液：实验者先有清水漱口后，取唾液lml，稀释100 倍左右。 5碘一碘化钾溶液。器材：1试管及试管架2恒温水浴锅3吸管5ml 1支，lml 4 支 四、操作 1取3 支试管，编号后各加入3ml 0.5 ％可溶性淀粉溶液及1 ml稀释唾液． 1号试管加lml 1％氯化钠溶液。第2 号试管加lml 0.5 ％硫酸铜溶液，第3 号试管加lml 蒸馏水。 2将上述3 支试管，放入37 ℃ 恒温水浴中保温10～15 分钟后取出（保温时间因唾液淀粉酶活力而异，重做一次，以求明显之结果）。冷却后分别加入4～5碘一碘化钾溶液观察比较三支试管颜色的深浅，并解释之。思考题： 1回忆激活剂与抑制剂的分类。2掌握激活剂，抑制剂对酶活性影响的方法。3如果定量测定激活剂抑制制对酶活性的影响方案如何制定？