血液基因组DNA小提取试剂盒.docVIP

血液基因组DNA小量提取试剂盒 一、产品简介 本试剂盒采用独特的细胞裂解液，配合蛋白酶K裂解细胞释放基因组DNA (能有效裂解血凝块)；释放的基因组DNA被选择性吸附到硅胶膜上。 适合从200 μl 哺乳动物全血或者10 μl 禽类、鸟类和两栖类全血中获得多至12 μg基因组DNA。纯化的基因组DNA长度可达20-30 kb，适合用于酶切、PCR、Southern杂交、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。 二、试剂盒组成和储存 组成内容 DK601-01 (50次) DK601-02 (200次) Proteinase K＊ 1 ml 4×1 ml Buffer GL 15 ml 60 ml Buffer WA§ 19 ml 75 ml Buffer WB§ 16 ml 65 ml DNA吸附柱-C 50套 200套 1.5 ml离心管 50个 200个 TE※ 15 ml 30 ml 说明书 1份 1份 ＊Proteinase K: 20 mg/ml, -20℃长期保存；频繁使用可置于4℃保存。 §Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。 ※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。 除Proteinase K外，其他组成成分于室温储存。 三、注意事项 1. Buffer GL和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。 2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。 3. 操作步骤1-4，需准确按比例加入血液材料和试剂，不然会影响实验效果。 4. 操作步骤2，此步骤为实验关键步骤，尤其是含有血凝块的血液材料。如果细胞裂解不完全或者有残留的血凝块，会堵塞DNA吸附柱-C中的吸附膜，大大降低DNA结合和洗脱效率，并且影响DNA纯度。 5. 操作步骤4，室温放置1-2 min，有助于提高DNA吸附效率，从而提高产量。 6. 操作步骤9，室温放置1-2 min，有助于提高DNA洗脱效率，从而提高产量。 四、操作步骤 细胞裂解 实验准备：56℃水浴，无水乙醇或者95%乙醇，将Proteinase K恢复至室温。 1. 在干净的1.5 ml离心管中加入200 μl血液材料(包括抗凝和非抗凝血) a. 哺乳动物全血不足200 μl时，用PBS补足体积至200 μl； b. 哺乳动物全血超过200 μl时，在步骤1-4中按比例增加试剂体积，但血液体积不可超过400μl（DNA吸附柱-C不能有效吸附过多的血液中的DNA），例如：40 μl Proteinase K + 400 μl血液材料 + 400 μl Buffer GL + 400 μl无水乙醇或者95%乙醇。 c. 禽类、鸟类和两栖类等因其血红细胞为有核细胞，每次处理不可超过10μl，并且用PBS稀释至200 μl。 ▲RNA残留可能会影响酶切但不影响PCR。如果需要去除RNA，可在此步骤加入8 μl RNase A1（50 mg/ml）溶液（客户自备），混合均匀。 2. 加入20 μl Proteinase K和200 μl Buffer GL，Vortex震荡10 s或者剧烈摇晃20次混合均匀，置于56℃水浴；水浴4-5 min后，以同样的方式震荡或者摇晃混合一次，继续水浴4-5 min。 ▲Buffer GL为粘稠溶液，需剧烈震荡或者摇晃使之与血液材料混合均匀，不然会导致细胞裂解不完全。 ▲如果血液材料中含有血凝块，剧烈震荡或者摇晃有利于打散血凝块，加快裂解速度。 3. 加入200 μl无水乙醇或者95%乙醇(此时可能会出现絮状凝集物，不影响实验效果)，温和翻转离心管10次混合均匀，避免产生大量泡沫，简短离心(离心速度达到3,000×g后立即停止)去除离心管盖上的液体。 ▲切勿长时间高速离心，防止絮状凝集物沉淀到离心管底。 DNA结合 4. 将溶液和絮状凝集物一起倒入或者用移液器转入DNA吸附柱-C中，室温放置2 min。 ▲如果血液体积超过200 μl，分两次将步骤3中的溶液转入DNA吸附柱-C中。 5. 室温12,000×g离心2 min，弃废液，将DNA吸附柱-C放回2 ml离心管中。 洗涤 实验准备：第一次使用前，按试剂瓶所示体积在Buffer WA和Buffer WB中加入无水乙醇或者95%乙醇。 6. 在DNA吸附柱-C中加入500 μl Buffer WA，室温12,000×g离心1 min，弃废液，将DNA吸附柱-C放回2 ml离心管中。 7. 在DNA吸附柱-C中加入500 μl Buffer WB，室温12,00