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亚临界CO2萃取技术在丹参浸膏有效成分分离中的应用 郑军军 卢保森 沈雨锋 赖伟财 (中山大学化学与化学工程学院，2001级，广州 510275) 指导教师： 陈六平 教授 摘要: 发现在亚临界条件下经过二氧化碳萃取，丹参浸膏中有效成分丹参酮IIA和隐丹参酮有相对分离的趋势。在萃取压力60～65 bar下，通过改变萃取循环次数，即萃取时间，对萃取物和萃余物成分进行研究。用高效液相色谱（HPLC）进行了定性半定量的测量，确证了在亚临界二氧化碳萃取条件下丹参酮IIA和隐丹参酮能在一定程度上相对分离富集。 关键词：亚临界二氧化碳萃取，HPLC，丹参酮IIA，隐丹参酮 1 前言 丹参药材是唇形科植物丹参的干燥根及根茎。丹参的化学成分主要有两大类：脂溶性的丹参酮类化合物和水溶性的酚酸类化合物。丹参脂溶性成分含有40余个二萜醌类化合物，统称丹参酮[1,2]。丹参酮中三种最主要的有效成分丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮均具有保护心肌缺血缺氧、抑制血小板聚集的功能，还具有明显的抗肿瘤作用。临床上丹参制剂主要用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、缺血性中风、细菌感染等多种疾病[3]。 近年来，随着新技术的不断发展引入，对丹参的研究越来越多，包括其提取方法，成分的分析等。传统提取丹参中有效成分的方法主要是乙醇热回流提取，然后浓缩成浸膏，用于各种制剂。由于提取温度高和受热时间长，有效成分损失严重，难以达到药典标准。超临界CO2萃取（简称SC-CO2萃取）技术是近年发展起来的新型提取技术，因其固有的众多优点，使中药有效成分的提取进入了一个新的阶段。由于超临界CO2萃取丹参酮工艺简单、萃取时间短、操作温度接近室温，丹参酮几乎不发生降解。使得丹参的有效成分的提取技术得到很好的发展，如今已有小型工业装置投产[4,5]。 丹参药材经超临界CO2初步萃取后得到的粗产物丹参浸膏是一个含有多种成分的复杂混合物，主要成分是丹参酮ⅡA和隐丹参酮。为了开发研制以隐丹参酮、丹参酮IIA为主成分或单一成分的I类新药，迫切需要开发提取、分离、纯化丹参主要有效成分的新技术及工艺，将上述混合物作进一步的分离和精制。用亚临界CO2萃取技术分离纯化丹参浸膏，迄今未见报道。为此，本工作应用亚临界CO2萃取技术于丹参浸膏有效成分的分离浓缩，以高效液相色谱（HPLC）为分析手段[5,6]，对萃取物和萃余物成分进行定性半定量的测量，取得了初步结果。 2 原理部分 CO2具有亲脂性的行为，与液体溶剂相比，其优点在于其选择性或溶解能力是可以调节的，如添加共溶剂可以使CO2的溶解能力和选择性得到显著改进，其变更范围可以从近似气体到近似液体。改变CO2溶解能力的另一个手段，就是改变操作过程的温度或压力。一般地，在高压下，利用超临界CO2萃取天然物时，除了目标组分被萃取外，许多不需要的物质也被同时萃取到产物中。压力越高，通常萃取得到的高分子量物质如蜡质等越多，有效成分的含量就相对越低。因此，常常需要对用超临界CO2萃取的产物作进一步的分级处理，才能获得所希望的最终产品。 物质分子结构不同，它在CO2中的溶解度也不同，而且其溶解度随温度和压力的变化规律也会不同。在亚临界条件下进行CO2萃取，其相当于用乙醚作萃取剂萃取。因此，极性较弱的物质会被萃取出来，极性强的物质则大部分留在萃余相中。丹参浸膏中主要成分为丹参酮，而其中的丹参酮ⅡA和隐丹参酮又占较大一部分。由图1所示的丹参酮ⅡA和隐丹参酮的结构可以看出，前者比后者多一个双键，可能由于这细小的差别引起的极性差异，使得用亚临界CO2可以将两种丹参酮按一定比例提取出来。 a 丹参酮IIA ( Tanshinone IIA ) b 隐丹参酮 ( Cryptotanshinone ) 图1 两种丹参酮的结构 Fig. 1 The structure of Tanshinone IIA and Cryptotanshinone 3 实验部分 3.1实验仪器与试剂 Agilent 1100 高效液相色谱仪 (美国)；亚临界二氧化碳萃取装置（德国）；丹参酮ⅡA和隐丹参酮对照品均由中山大学分析测试中心HPLC实验室提供；超临界CO2萃取丹参浸膏（西藏林芝）；色谱纯甲醇，无水乙醇（A. R.）。 3.2 实验方法 称取3.6g丹参浸膏，用玻璃丝分层填充至滤套中，装好装置（如图2a, 如何装配装置请看文献[7]），向装置中充入CO2 250g，固定萃取压力p＝60～65bar，萃取釜底部温度T1＝(35.0 ( 1.0)℃，制冷温度T2＝(15.0 ( 0.1)℃，通过改变萃取循环次数，即萃取时间，进行实验。循环次数分别为6、10、14、18、22、26，其中14次循环进行了3次平行实验（萃取实验装置如图2b所示）。萃取完毕，称量萃取物的