靶向四链体DNAs邻菲罗啉衍生物的设计合成及生物活性研究.docVIP

靶向四链体DNAs邻菲罗啉衍生物的设计合成及生物活性研究 【摘要】：本论文设计合成了6个全新的1.10-邻菲罗啉衍生物(1-6)。利用生物物理和生物化学方法系统研究了化合物1-4与人端粒G-四链体和i-motifDNAs以及启动子c-kit2和c-mycG-四链体DNAs的相互作用,测试了它们对端粒酶活性、启动子转录活性、癌细胞以及细胞周期的影响。主要结果如下：1、设计合成了6个全新的以1,10-邻菲罗啉为主体的衍生物(1-6),并用红外光谱、1HNMR、13CNMR、ESI-MS及元素分析等方法对其进行了结构表征。2、CD光谱表明,化合物1-4能诱导人端粒序列DNA(HTG21)从无序折叠或杂交G-四链体结构转变成反平行G-四链体结构。进一步结合FRET-熔点实验及PCRstop分析发现,在25倍摩尔当量双螺旋DNA(ds26)存在下这些化合物能选择性识别并稳定反平行G-四链体DNA。TRAP分析表明化合物1-3在2μM时几乎完全抑制了端粒酶活性。3、利用JobPlot、紫外可见吸收光谱和竞争透析法和等研究了化合物1-3对人端粒G-四链体和i-motifDNAs的亲和性及键合计量比。结果表明这些化合物对G-四链体和i-motifDNAs的键合计量比分别为2：1和1：1。结果表明化合物1-3对上述四链体DNAs的亲和能力大于ctDNA。UV-熔点实验表明化合物1-3使i-motifDNA的熔点温度升高7.2-10.1。热力学参数(AG,ΔH和ΔS)表明,化合物1-3与四链体以及双螺旋DNAs的键合都是熵驱动的过程。4、利用CD光谱、PCRstop分析、FRET-熔点实验、紫外可见吸收光谱和FID方法研究了化合物1-3对致癌基因启动子c-myc和c-kit2G-四链体DNAs构象的影响、稳定作用、亲和能力。CD光谱表明,化合物1-3的键合略微扰动c-kit2G-四链体的构象,而对c-myc的构象没有显著的影响。化合物1-3能中等程度地稳定c-myc及c-kit2G-四链体DNAs,而且比双螺旋DNA具有更高的键合选择性。三个化合物对c-kit2的稳定作用大于c-myc,但是对c-myc有更高的亲和能力。另外,实时荧光定量RT-PCR结果表明,化合物1能下调HepG2癌细胞中c-kit2和c-myc基因的转录水平。5、MTT分析表明,化合物1-4都可以抑制HeLa和HepG2细胞的增殖。与癌细胞孵育72h,化合物1-3对HeLa细胞的IC50值大约为2μM,化合物1-4对HepG2细胞的IC50值为0.5-4.4μM；对HepG2细胞长期毒性实验表明,化合物1-3对癌细胞增殖抑制具有一定的时间依赖性。流式细胞术买验结果表明,化合物1-3将HeLa细胞周期阻滞在Go/G1期；而这些化合物处理HepG2后,G0/G1期细胞数量略微减少。【关键词】：G-四链体邻菲罗啉端粒酶致癌基因启动子癌症 【学位授予单位】：山西大学 【学位级别】：博士 【学位授予年份】：2013 【分类号】：TQ463;R96 【目录】：创新之处14-15中文摘要15-17ABSTRACT17-19第—章综述19-611.1引言191.2四链体DNAs19-301.2.1G-四链体DNAs的结构及生物学功能21-291.2.1.1G-四链体DNAs的结构21-251.2.1.1.1人端粒G-四链体DNAs的结构21-221.2.1.1.2癌基因启动子c-kit2和c-mycG-四链体DNAs的结构22-251.2.1.2G-四链体DNAs的生物学功能25-291.2.1.2.1人端粒G-四链体DNA与端粒、端粒酶及癌症的关系25-281.2.1.2.2原癌基因启动子c-kit2和c-mycG-四链体DNAs的功能28-291.2.2I-MotifDNA的结构及功能29-301.2.2.1I-motifDNA的结构29-301.2.2.2I-motifDNA的功能301.3G-四链体DNAs靶向分子的研究进展30-371.3.1有机小分子化合物与G-四链体DNAs的作用模式31-331.3.2靶向G-四链体DNAs的有机小分子化合物33-371.3.2.1氟代喹诺酮类化合物33-341.3.2.2端粒抑素类化合物34-351.3.2.3吖啶类小分子配体35-361.3.2.4卟啉类化合物36-371.3.2.5AS1411371.4四链体DNAs与小分子配体相互作用的研究方法37-471.4.1研究键合亲和性及构象的方法38-421.4.1.1紫外可见吸收光谱38-391.4.1.2圆二色光谱39-401.4.1.3荧光光谱40-421.4.2研究结构参数的方法42-431.4.2.1X-Ray晶体衍射421.4.2.2核磁共振波谱42-431.4.2.3分子模拟43