牛骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学特性的研究.pdfVIP

巾匿簧牧簧医学会动物繁夔学分会第十三攥学术研讨会论文集 牛骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学特性的研究 封纪武L2董雅娟佧赵兴1曹雷L4于进亮1岳福杰1柏学进1赵晶3刘顺德2 1莱阳农学院动物胚胎工程中心山东青岛266109；2宁夏火学农学院宁夏银川750021；3西北农林科技 大学家畜生殖内分泌与膝胎工程农照部重点开放实验窒陕疆杨凌712100；4华南农泣大学兽医学院广东广娜 510642 Stem 捅要【目的】建立牛骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalcells，MSCs)分离培养体 系，研究MSCs的生物学特性，并对英进行鉴定。【方法l通过黠壁筛选法分离纯化牛MSCs，铡置 乙醇进行诱导，观察其形态的变化。【结果】原代和传代培养的细胞呈成纤维细胞形态，第2代(P2) 渐减慢。MSCs经B一巯基乙醇诱导后可见神经元样细胞出现。【结论l建立了牛MSCs俸外分离，培 养体系，获得可稳定传代的牛MSCs。试验表明，俸外培养的牛MSCs生长稳定，传代后的细胞适应 挫强，增殖较快，无分纯倾向，为进一步研究牛MSCs的诱导分化扣应用打下基础。 关键葫l骨髓间充质于细胞；细胞培养；神经细胞；生物学特蛙 骨髓组织中除含有造血于细胞以夕}，还会有鸯髓阕充震干缨胞(marrow stem mesenchymal cells，MSCs)，是存在于骨髓中不同于造血干细胞的另一类具有多向分化潜能的干细胞，由于其可以 marrowstromal 作为滋养层支持造血千细胞生长，因而也被称为骨髓基质细胞(bone cells，BMSCs)。 在体努不冠蟪诱导条传下具有肉中胚层，内胚层和李孛经外胚层来源的组织细胞分化豹潜能，如成规 细胞、成骨细胞、脂肪细胞【l】、心肌细胞【2】、神经细剧31、肝脏卵蹰细胞【4】、星形胶质细胞【5】、肌腱 以及软骨细胞嘲等。MSCs来源十分广泛，存在于多种组织中，目前已成功从骨髓、脂肪、外周血、 舅手脏[71、脐巍【8】、小梁嚣网、胎群Ho】、皮肤真皮层{l等组织孛分离得到MSCs，其中骨髓和脐盎申含 量最为丰富。由于其来源广泛，取材方便，易于分离，可自体移植，不存在免疫排斥以及伦理限制 等问题，是组织工程理想的细胞来源而日益受到学者们的亲睐。目前关于牛MSCs的研究较少，能 获取稳定传代，傺持良好的未分亿状态的MSCs是分离培养MSCs，并爝于遴一步试验的首要髫的。 本试验路在建立～套稳定、成熟的牛MSCs分离培养和扩增的体系，在体外培养条件下获得纯度较 高用于研究的MSCs，通过对其诱导后出现的分化袭型来鉴定，研究其生物学特性。 1试验材料 1．1骨髓样本取自6月龄良种健康荷斯坦奶牛股骨头。 王．2主要试剂L-DMEM，胰蛋白酶，争巯基乙醇，PBS‘，青霉素一G，硫酸链霉素，毛．谷氨酰胺(以 上均购自Sigma公司)FBS(Hyclone公司)，EDTA(天津媾迪化工有限公司)。 2试验方法 2，1骨髓赆Cs的分离秘原代培养 射器的针头将采集蓟的骨髓打散，制成细胞悬液，过200目滤网，将细胞懋液嚣于离心管中，809 L．谷氨致胺及 基金项爨：山东省自然科学基金资助项县(编号：Y2005D01) 作者简介：封纪武(1980-)，男，宁夏回族自治区石嘴山入，在读研究生。研究的方向：动物胚胎工程及成体干绷胞 枣逶讽作者：董雅娟(1964-)，女，教授。F，mali：etcenter@126。comTel：0532 中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十兰届学术研讨会论文集 的生长情况，记录观察结果。72h后全量换液，弃去未贴壁细胞，以后每72h全量换液一次。换液 时弃去原培养液，用PBS。轻轻冲洗平胍三遍，以便充分冲掉贴附在MSCs表面的以及未贴壁的杂细 胞，加入2mL新鲜培养液，继续培养。 2．2骨髓瞒Cs的扩增和传代培养 9d厝，细胞接近90％以上的融合，弃去原培养液，用PBS一冲洗三遍，加入含0．25％