第四节固体菌种制作(彩色).pptVIP

一、培养基的种类 二、培养基的制作 三、接种 四、菌种培养 五、银耳混合菌种的分离与制作 培养基的分类方法主要有：按培养基成分的了分类、按培养基外观的物理状态进行分类、按培养基对微生物的功能作分类等。 天然培养基：利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。 组合培养基：按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。 半组合培养基：指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如，马铃薯蔗糖培养基。 一、母种培养基 1、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA） 马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼脂20g、H2O 1000 mL、pH 6.5。 适用于一般食用菌母种分离与培养，但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。 2、综合马铃薯培养基 马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素B1 10mg、琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。 适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌种分离、保藏。 二、PDA培养基配制方法 马铃薯（去皮、去芽眼）→切成片（玉米大小）→称取200g＋1000mL H2O→煮沸15-20min →双层纱布过滤→取滤液并补足1000mL＋琼脂→熔化＋其它营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→塞上棉塞→捆扎→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d） 阔叶锯末屑78%，米糠和麦麸20%，蔗糖1%，石膏粉1%，水120%~130%；采用棒式栽培种或袋式菌种有机制作法，酒精消毒蒸汽接种；选高密度低压聚乙烯透气袋机械装袋，顺码锅常压炉灭菌，焖锅后趁热出锅，移入出菇棚冷却，棚内设日接１万棒的塑料帐，帐内用来苏水或酒精喷洒消毒后，快速接种法接种，发菌；每出一茬菇后，即停水养菌，待菌丝完全复壮后再刺激催下茬菇；用石灰定期消毒，保持栽培场地碱性环境；发生虫害时用定点诱杀法处理。 在无菌条件下将母种接到经过灭菌的培养基上，称接种。培养基灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。 要保证接种成功，必须要使接种能在无菌的环境中进行，即须在灭过菌的无菌室或接种箱中进行，而且操作者必须用肥皂洗手，须穿着干净整洁的衣服，最好配戴口罩，接种用的各种用具也应经过灭菌。 接种后的母种，置于25℃左右的恒温箱中培养。2~3天后检察并剔除霉菌小菌落或细菌小点。纯菌种在培养7~15天，即可培养出母种菌丝。 原种及栽培种后置于25℃培养室中，空气湿度60%~70%，避光，加强通风。前期2~3天检察一次，菌丝覆盖后7~10天检察一次。淘汰污染的。 * *