离子对反相高效液相色谱法测定保健食品中肉碱.pdfVIP

维普资讯 · 实验 技 术 与方法 · 离子对反相高效液相色谱法测定保健食 品中肉碱 赵 榕 孙 开奇 罗仁 才 (北京 市疾 病预 防控制 中心 ，北 京 100013) 肉碱 (Carnitin)，分子 式 为 (CH 3N CH，CH(OH) 1．3 实验方法 CH：(CO0一)，化 学 名 称 为 一羟 基一了一三 甲基 氨 基 丁 1．3．1 试样制备 固体试样取 20g左右 ，混合均 酸 ，是一种低分子 、水溶性 营养素 。… 肉碱不仅在脂 匀 ，粉碎 ，称取 0．5g(含 肉碱 约 40mg)；液体试样取 肪酸 的B一氧化过程 中，作载体将长链脂肪酸转运入 5．0mL，于 50mL容量瓶 中，加入 0．50mmol／L盐酸 线粒体进一步氧化 ，而且在生酮作用 、生热作用 、支 约 35mL，超 声提取 10min，用 0．50mmol／L盐酸 定 链氨基酸代谢 、防止高脂酰辅酶 A的毒性蓄积 以及 容 ，混匀 ，过滤 ，弃初滤液数毫升 ，收集滤液 ，过 0．45 游离辅酶 A的再生方面均有一定 的生理功能 。 近 ”m水相滤膜 ，为试样处理液 。供 HPLC分析。 来研 究发现 肉碱 在心血管病治疗 、 肝 肾病治疗 、 1．3．2 色谱分析 分别取标准溶液及试样 10 L 减肥 、 提 高运动能力 、。抗衰老 等方 面具有重 进样 。根据保 留时 间定性 ，试样 峰面积 与标准峰面 要 的作用 。 目前 ，以肉碱 为主要原料和功效成分保 积 比较定 量 。 健食 品很多，为此 ，我们在卫生部基金资助下 ，建立 1．3．3 结果计算 =C×V／M 式 中： 为试样 了离子对反相高效液相色谱法测定营养保健食 品中 中肉碱含量 ，mg／g；C为试样 处理液 中肉碱 的浓度 ， 肉碱 。 mg／mL；V为试样定容体积 ，mL；M 为试样重量 ，g。 1 材料与方 法 2 结果与讨论 1．1 方 法原 理 试 样 中 的 肉碱 以 0．5mmol／L盐 酸 2．1 分离体 系的选择 分别用反相液相色谱 、离子 超声提取 ，在酸性流动相 中带正 电和带负 电的离子 交换色谱 以及离子对反相液相色谱等分离体系对 肉 对 与试剂辛烷磺酸钠结合形成疏水性离子对 ，经反 碱进行 了测试 ，由于反相液相色谱法色谱柱对其不 相色谱分离 ，与标准 的保 留时间 比较定性 ，以峰面积 保 留，离子交换色谱法 峰形不好且灵敏度达不到要 外标 法定量 。 求 ，因此 ，反相色谱法和离子交换色谱法不 能用于 肉 1．2 仪器与试剂 碱 的分 离和测定 。根据 肉碱 的性 质 ，对溴 化 四丁胺 1．2．1 Waters高效液相色谱系统 配有 2487紫外 及辛烷磺酸钠 2类不 同性质离子对试 剂进行 了测 检测器 ；510泵 ；Millennium32工作站 。超 声 波提取 试 ，使用溴化 四丁胺作为离子对试剂时 ，肉碱得不到 器 。溶剂微孑L过滤器带 0．45 m水相滤膜 。色谱条 很好 的分离 ，而辛烷磺酸钠作为离子对试剂时 ，可以 件 ：Shim．packCLC—ODS色谱柱 (岛津公司 )，4．6mm 得到较好 的分离效果 、峰形及 灵敏度 。因此选择 以 ×200mm；检测波长 ：210nm；流动相 ：称取 3．4g磷 辛烷磺酸钠作为离子对试剂的反相液相色谱法用于 酸二 氢钾溶液 (0．05mol／L)及 0．22g辛烷磺 酸钠 肉碱 的分 离和测定 。 (0．002mol／L)溶于 500mL水中，用磷酸调 pH=2．5， 2．2 色谱条件 的选 择 流动 相 中离 子对 试剂 的浓 乙腈 (色谱纯)含量为 10％；流速