基因重组Echistatin发酵工艺的优化_百替生物.pdfVIP

基因重组Echistatin 发酵工艺的优化* 中国生物工程杂志China Biotechnology, 2005, 25(12):66～69 杨利军杨涛解军赵志强牛勃** （山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001） 摘要目的：利用基因工程方法对一种蛇毒锯鳞蝰素蛋白的发酵纯化工艺进行优化，以提高目的蛋白的 产量和纯度。方法：对工程菌进行发酵培养并诱导表达，研究不同的培养基、不同补料方式、溶解氧 浓度、培养和诱导时间对工程菌产量和目的蛋白表达量的影响，利用几丁质亲和层析纯化Ecs 融合蛋 白，通过合适温度和pH 裂解融合蛋白得到Ecs 纯品，并鉴定和检测Ecs 活性。结果：经过高密度发酵 优化后，菌体湿重可达 110 g/L，目的蛋白表达量约占总蛋白的40%；亲和层析纯化后，得到Ecs 单体， 得率为68 mg/L 发酵液。生物学活性分析显示，重组Ecs 能有效抑制血小板的聚集，其活性与天然Ecs 相似。结论：通过发酵和纯化工艺优化，大大提高了目的蛋白产量，为进一步规模化研究和生产奠定 了基础。 关键词蛇毒锯鳞蝰素大肠杆菌发酵纯化 收稿日期：2005 07  18 修回日期：2005 09 21 * 山西省自然科学基金资助项目,山西省留学归国人员基金资助项目(200159) ** 通讯作者，电子信箱：niu