家蝇触角cDNA文库的构建及质量分析.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2005。Apr．26 (2)：203—028 CN53—-1040／Q ISSN0254—-5853 ZoologicalResearch 家蝇触角cDNA文库的构建及质量分析 朱彬彬-，一，姜 勇，牛长缨，张长禹，雷朝亮 (1．华中农业大学 昆虫资源研究所，湖北 武汉 430070；2．宜昌市疾病预防控制中心，湖北 宜昌 443000) 摘要：采用SMART (switchingmechanismat5endofRNAtranscript)技术，构建了家蝇 (Muscadomestica) 的cDNA质粒文库。按TRIzolReagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA，以此为模板，通过PowerScriptMT 反转录酶反转录合成第一链 cDNA；再以第一链 cDNA产物为模板，用LD．PCR合成cDNA双链。该cDNA产物 经分级分离、连接和电转化，即得到家蝇触角cDNA原始文库，其滴度为6．3×10scfu／mL。对原始文库进行扩 增，取适量扩增文库稀释并涂平板，用PCR方