人DNA拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! %’ (! ) (! 年 月 !# $ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-. !# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人!# 拓扑异构酶 在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化 ! ， 2 ! 2 # 2 $ 2 杨国武 袁保红 何国平 戴 欣 林永成 周世宁 2 （中山大学生命科学学院生物化学系，广州 :2!1: ） ! （深圳市计量质量检测研究院，深圳 :20:: ） $ （中山大学化学与化工学院天然产物研究室，广州 :2!1: ） # （香港理工大学应用生物与化学技术系，香港） 摘 要 为了在体外以人 拓扑异构酶 （ ）为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选，用 法从 D)5 ! .6E ! F6/GHF I7’+ 细胞中克隆了.6E 基因JF8 并在毕赤酵母中首次成功表达，表达产物可分泌到发酵上清，易于制备。蛋白酶5 ! 缺陷的重组酵母（ ）分泌重组酶的能力比具有蛋白酶 活性的重组酵母（ 和 ）更高。 K*D/.6EL 5 M$$/.6EL N*/.6EL 通过发酵条件的优化，使用 （ ），于 ，每隔 补加 （ ）的甲醇和 （ ）的营养液， O**P EI 1 Q!: !R !#. Q: S 3T 3 $S 3T 3 诱导 后可表达最高的酶活力（ ），发酵上清中 可达 ，约占总蛋白的 。 K*D/.6E ! 1!. #$ATU .6E ! 22 VT U 2 S KDK/G5W; 和X7Y7,C Z’Y 分析显示，表达的.6E 为32[D 蛋白，无糖基化修饰。 ! 关键词 人 拓扑异构酶 ，分泌表达，优化，毕赤酵母 D)5 L 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） \104 5 2/$42 !# !/202/4 拓扑异构酶（ ）通过调节 纯化步骤也十分复杂，且在分离纯化过程中酶活性 D)5 D)5 YE=7,+7 D)5 的拓扑结构，在细胞代谢过程中起着极重要的 极易丧失。为了获得足够的酶供研究和应用，本文 应用了毕赤酵母表达系统。毕赤酵母（