同位素亲和标签(ICAT)系列技术及其在蛋白质组研究中的应用.pdfVIP

癌奄 ·畸变 ·突变 2003年 川月第巧卷第4期 Can:inogenesis,T-1.genesisandNwugeneasVol15No40,t..2(X)3 文章编号:1004一616X(2(X)3)04一0244一05 ·综述 · 同位素亲和标签(ICAT)系列技术及其在蛋白质组研究中的应用① 荣 举 ’J，许丽艳’，李恩民” ( l 油头人学医学院生物化学与分子生物学教研室,2油头大学医学院肿瘤病理研究室，广东 汕头 51503价 摘【要」近年来，大量的研究结果表明双向电泳技术由于不能对分子量极高或极低 等电点极酸或极碱和含量低的蛋白质以及膜 蛋白质等进行有效分离，因此已不能适应目前蛋自质组研究深人发展的需要 同位素亲和标签(isotope-endxlaffinitytag,ICA91技 术是最近发展起来的一种用于蛋白质分离分析的新技术.由十采用了一种全新的化学试剂一ICAT试剂，同时结合了液相色谱和 串联质谱，因此不但明显弥补了双向电泳技术的 卜述不足，同时还使高通量、自动化蛋白质组分析更趋简单、准确和快速。代表 着目前蛋白质组分析技术的本要发展方向。最近针对磷酸化蛋白分析以及与固相技术相结合TCAT技术本身又取得了许多有意 义的进展，已形成 [CAT系列技术 对此本文进行了全面综述1 关【健词1同位素亲和标签;蛋白质组;双向电泳;质谱;磷酸化蛋白同位素亲和标签试剂;固相同位素标签试剂技术 中图分奏号:(1503 文献坛识码.A 随着人类基因组计划快速向前推进，大部分人类 质的相对含量4’‘，以判断正常与疾病状态下蛋白质表 基因组序列已测序完毕，我们所面临的巨大挑战是如 达的变化 寻找疾病的发病机制 何解释所获得的大量基因序列信息并加以应用，以进 与基因组学研究相比，蛋白质组学研究的对象数 一步从结构、功能和生物学过程调控的角度解释一个 量极大，所以蛋白质组学要求对复杂混合物中蛋白质 物种基因序列中所含的信息。因此全面发展了基因组 成分做到快速分离、高通量定量和定性，然而目前还 在，71INA水平表达情况的测量方法，以衡量细胞在某 没有哪个单独的实验或技术平台可以在蛋自质组范 一状态下的功能[D.al，并用于寻找鉴定细胞在某一状 围内做到这点。研究蛋白质组最常用的方法是通过高 态F的独特型基因。尽管这些方法非常灵敏，但mB，分辨率双向聚丙烯酞胺凝胶电泳分离蛋白质，显色、 NA表达水平高低往往与蛋白质浓度没有必然相关 取点，再用质谱或串联质谱测序鉴定蛋白质点Il。这 性，且人们发现基因表达和转录不能完全解释细胞的 种方法的缺点是:①仅检测到某 一类蛋白质，而不易 生理功能 ，)‘，而一个基因的功能、与其它基因产物及 检测到膜蛋白、分子量非常大或非常小的蛋白质、等 其亚细胞结构之间的功能联系，最终都必须通过在蛋 电点极偏酸或极偏碱的蛋白质;②高丰度蛋自容易检 白质水平对基因产物的研究才能确定。于是研究人员 测到，但不易检侧到含量相对较低，在细胞内对生命 的目光又转向基因产物，细胞功能的执行者一蛋白 活动起调节作用的蛋白质，如转录因子和蛋白激酶 质，蛋白质组学因此而生。蛋白质组学是全面分析和 等;③双向电泳的操作连续性较强，劳动密集，难以实 研究一种细胞或组织的基因组表达的全部相应的蛋 现自动化;④双向电泳的重复性较低;⑤电泳凝胶七 白质，研究蛋白质之间的相互作用与联系.在蛋白质 的蛋白质斑点很大一部分包含一种以上的蛋白质，而 水平上对细胞或机体基因表达的整体蛋白质的定量 有时一种蛋白质经过不同的修饰或处理后在凝胶中 研究，来揭示生命的过程和解释基因表达调控的机 形成不同的斑点，这些情况使定量分析复杂化;⑥双 制，其中心目标是系统的鉴定复杂样品所含的蛋白质 向电泳以依次鉴定单个蛋白质点为基础，限制检测速 或通过比较不同状态的蛋白质样品，测定同一种蛋白 度。以上这些缺点，目前已明显限制了定量蛋自质组 工 收稿日期 2003一03一18修订日期:2003一04-16 基金项目:国家自然科学基金项目