大熊猫气味标记DNA的制备和序列分析.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 1998，19 f5)：34a4~349 CN53—1040／0 ISSN0254—5803 备备和和序列分析 平①④ 张金国③ 张成林@ 张锡格③ (①中国科学琬昆莉材研究所细胞与分子进化开放研究实验室 县明 650223) (@美目圣地亚哥动物协会 圣地亚哥 CA92112) (③北京莉材园 北京 100044) 摘 要 大熊猫气味标记在其个体问的通讯中具有重要意义。用不同方法收集了7只大熊 猫个体的9个气味标记样品，运用 IT1stag朗eKit制备出了DNA。采用PCR扩增线粒体D一环区 和细胞色素b基因、Thr-tl~NA基因片段并作序列分析。结果提示，不同收集方式所得气味标记 样品均有DNA，但用于棉花棒收集样品的方法最佳。该方法为大熊猫的遗传多样性研究提供了 新的筒捷有效的DNA来源。 n 一 ． ， ，一 美中-铘 §啦气睦拯 ，旦_雎 厍 I々 1 圈分类号 Q959．838 f 大熊猫 (Ailuropodamelanoleuca)被 IUCN列为濒危动物之一。据调查，目前野外 生存的大熊猫仅 1000只左右 (Zhou等，1996)。大熊猫赣以生存的自然竹林逐渐减少和 分散分布也影响着大熊猫的生存数量。70年代中期竹子大面积 自然更新使大熊猫的生存 受到影响，近年来大熊猫栖息地生境频遭人为破坏，很多地方的种群数量仍在不断下降， 这一现象引起了各国科学家的高度关注 (胡锦矗，1991)。为了制定科学、经济有效的保 护对策，必须探人了解大熊猫 自然群体的遗传结构。描用传统的方法从 自然群体中采集遗 传分析样品 (如血液或其他新鲜组织等)通常十分困难，甚至有时是不可能的。因此 ，寻 找简单、便捷的非损伤性 (non-lnvasive)DNA制备途径与方法显得极为必要。 许多动物都有遗留自己气味作为标记的习性，大熊猫亦然。大熊猫尾基部有一段腺 体，经常从此腺体中分泌一种气味并将其留在岩石、树木、草丛等处。野外观察表明，大 熊猫在一定区域活动时，常在一定位置留下气味标记 (scentmrk)，可作个体存在的识 别。发情期间，气味标记活动的频率增加，以促进两性问的信息交流。这些迹象表明，气 味标记在大熊猫个体间的通讯中具有重要作用。但 目前对大熊猫气味标记的成分、确切功 能和详细机理尚不十分清楚。由于气味标记物是留在大熊猫体外的，因此，可以在不直接 接触动物的前提下，采集到气味标记样品。这样就为我们研究大熊猫的保护遗传学提供了 一 种更加方便的取样途径。而大熊猫的气味标记物中是否保留有DlA。能否用之于保护 遗传学研究 ，无疑是十分有趣的问题。 0 联系人 e_皿Bd： 且力啪)@public． ．ya．∞ 本文 1997一ll一13收到，1998—04—07营回 维普资讯 5期 丁 渡等：大熊猫气味标记 DNA的村备和序列分析 近年来，一些简单、快速、非损伤性取样分离制备DNA的方法相继建立，例如毛 发、皮张、羽毛、