实时荧光定量PCR技术在出入境检验检疫中.pdfVIP

应用技术 ■—●—■—■■■●—■■■■■——■●—■■—■● and Review Chjn8scienceTechnology q●I 实时荧光定量PCR技术在出入境检验检疫中 的应用研究进展 薛银刚陈军宋白薇石建华鞠慧萍郑晨 (苏州出入境检验检疫局江苏苏州215104) [摘 要]实时荧光定量PcR是一种将核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起的新技术。由于其检测速度快，且灵敏性高、特异性好、 定量准确而被广泛应用于食品中致病微生物的检测。本文主要从食品致病菌、植物病害和动物疫病三方面来总结实时荧光定量PcR在出入境检验检疫中的应 用研究进展。 [关键词]实时荧光定量PcR检验检疫研究进展 中图分类号：TQ617．3 文献标识码：A 文章编号：1009—914x(2010)04一0225一Ol et 3实时荧光定量PcR技术在动物痰瘸早期诊断中的应用 2009)和后睾吸虫(Intapana1．，2008)等。 3 1在动物病毒上的检验检疫 4不足与展望 猪流感(swineinfluenza，sI)是由猪流感病毒所引起的猪的一种急性、实时荧光PcR技术自问世以来，由于其特异性强、灵敏度高、重复性 传染性呼吸道疾病。虽然此病的死亡率不高，但会引起其他死亡率高的并发 好、定量准确、速度快等优点，已被广泛应用到生物学各个领域涉及到的范 症，如猪繁殖与呼吸综合征PRRs。因此如何快速有效地诊断猪流感也越来越 围包括DNA，mRNA和病毒荷载量的定量、核酸多态性分析、基因突变等多个 受到大家的重视。王云龙等(2009)提出了用荧光定量PcR方法进行H3亚型领域。随着该技术的不断使用，它的不足也逐渐显现，如它是基于短的DNA片 猪流感病毒的检测，根据H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计引物和 段，所以无法检测到发生在转录后的基因沉默事件中的选择性剪接或部分转录 TaqMan探针，结果表叽荧光定量PcR检测灵敏度较高，且有良好的准确性和重降解等生物相关进程，而且荧光探针合成较难、成本大，实验仪器价格高，从而 现性。王小武等(2008)利用sYBRGreenI作为发光物质，根据PRRs病毒GP5大大提高了实验成本。可将多种分子技术结合使用，产生互补效应，如有人提 蛋白基因核酸序列设计引物，实验表明荧光定量PcR阳性检出率为100％，且灵出可将基因芯片技术和多重PcR等技术相结合，届时将大大推动该技术在生命 敏度是普通PcR的100倍，该方法具有很高的敏感性、特异性和稳定性。 领域的推广。 口蹄疫是一种非常严重的动物传染病，在世界范围内造成了巨大的损失。 参考文献 花群义等(2005)按照口蹄疫病毒F曲V聚合酶3D基因序列，设计合成了引物和 [1]LetertreC，PerelleS，DilasserF，eta1． Detectionand 探针，对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的FMDv进行了特异 real—timePCRofthe enterotoxingenes genotypingby staphylococcal