实时荧光定量PCR技术在出入境检验检疫中的应用研究进展(连载).pdfVIP

科学论坛 愚悫黑焉拣意丽啊 实时荧光定量PCR技术在出入境 检验检疫中的应用研究进展(连载) 二 薛银刚陈军宋白薇 石建华鞠慧萍郑晨 (苏州出入境检验检疫局 江苏 苏州 215104) 高、特异性好、定量准确而被广泛应用于食品中致病微生物的检测。本文主要从食品致病菌、植物病害和动物疫病三方面来总结实时荧光 定量PCR在出入境检验检疫中的应用研究进展。 [关键词]实时荧光定量PCR检验检疫 研究 进展 中图分类号：TB 文献标识码：A 文章编号：1009—914x(201O)02—0017一01 PcR，全称聚合酶链式反应是一种DNA体外扩增技术。自1985 中毒事件日见增多，已引起国内外的广泛关注。翁文川等(2005)根 年问世以来，该技术迅速被广泛应用于各种基础研究和生物特异性基 因检测，特别在生物特异基因检测、有害生物鉴定等方面得到了广泛 针并优化体系，建立了荧光PcR检测单增李斯特菌的方法，该方法检 的应用(侯宇，2009)。但是传统的PCR在应用时存在很多局限性，如 出现假阳性、EB染色对操作者的危害及环境的污染、不能准确定量等。 因此为了克服这些缺陷，实时荧光定量PcR应运而生，实时荧光定量 PcR技术，是指在PcR反应体系中加入荧光基团，利用荧光积累实时 线、细胞校正曲线和质粒校正曲线，三种校正曲线检测样品得出的结果 监测整个PcR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方 基本吻合。该方法灵敏度高、特异性好、准确，可应用于食品中单增 法。根据荧光类型，它可分为引物标记、染料类和探针类三种。引物 标记是直接对引物进行荧光标记从而使荧光标记基团直接掺入PCR扩 时荧光PCR定量方法，可应用于食品中单增李斯特菌的检测。 增产物的方法：染料类是利用特定染料与dsDNA小沟结合发出荧光， 1．3产肠毒素大肠埃希菌 利用荧光强度来计算扩增产物的增加；探针类是利用能与靶序列特异 杂交的探针来指示扩增产物的增加(蔡霞，2005)。 荧光定量PCR技术由于其特异好、灵敏度高、快速简便和可定量 性等特点，被认为是一项具有革命性的技术，目前已被广泛应用于出 入境检验检疫中，本文主要分成食品致病菌、植物病害和动物疫病中 SYBRGreen I荧光定量PCR技术建立了快速检测原料乳中大肠杆菌 的早期诊断三部分分别进行综述。 (一)实时荧光定量PCR技术在食品致病微生物早期诊断中的应用rfbE基因设计引物和探针，优化该菌的TaqManPcR反应条件，建 食源性致病菌导致的食品安全事件频频发生，据WHO统计，发达 立了大肠杆菌O。：H，实时荧光PCR检测方法。 国家每年约有三分之一的人感染食源性疾病，美国每年的食源性疾病 1．4金黄色葡萄球菌 多达7600万例。而在一些发展中国家，食源性疾病往往是导致人的非 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus 正常死亡的主要原因，全世界每年有220万人因患食源性疾病而丧生， 而亚太地区每年就有70多万人死于食物中毒，其中致病菌的危害及影 响占重要地位。为了加强口岸贸易检验流程的时效性，加强我国食源 性疾病的致病菌监控和溯源，迫切需要建立一种对食品致病菌快速、 准确的早期诊断体系，以确保在较短的时间内正确判定食品的安全性， 确保消费者的人身健康安全。 食品中许多常见微生物如水产品中的霍乱弧菌、副溶血弧菌，奶 对金黄色葡萄球菌进行准确快速及定量检测。 制品、禽肉及其制品中的中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌0157、 l-5志贺氏菌 金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、sARs病毒、禽流感病毒等均可污染食品 而导致多种疾病的爆发与流行，这些细菌都会对人体健康产生严重影 响，实时荧光定量PC