生物化学复习总结.docVIP

探针的分类 根据化学组成，可以将探针分为DNA、RNA、PNA及寡核苷酸探针。 DNA探针 这类探针应用最广，可以通过化学合成、克隆或PCR技术获得。 RNA探针 一般用RNA聚合酶体外转录克隆的DNA序列获得。RNA-RNA杂交分子在所有可能的杂交分子中最稳定，但RNA探针容易被RNase降解。 肽核苷酸（PNA）探针 PNA寡聚物是一类新分子，其结构与DNA相似。但在PNA中，没有核糖-磷酸基骨架，其骨架是不带电的肽链(聚酰胺） 寡核苷酸探针 它是根据探针靶序列的碱基顺序用化学方法合成的单链DNA，其长度为15-20核苷酸。由于分子小，因此更容易渗透到细胞的目标区域；但也正由于分子小，限制了其所能携带的荧光基团或报告分子数目，并最终导致杂交后荧光信号较弱。因此这类探针仅实用于对重复单位较短的高度重复序列的荧光原位杂交分析 DNA纯化方法 如果样品中残留的盐和SDS的浓度过高：酒精/NaAc沉淀，70%酒精洗 如果样品中残留的RNA过多：RNA酶37C半小时，酚/氯仿去除RNA酶 如果样品中残留的蛋白质、酚过多：酚/氯仿去除 DNA浓度测定 紫外分光法： 1 OD260 = 50 g / mL ds DNA（双链） = 40 g / mL ssDNA / RN（单链） 计算举例： 15 μL DNA原液稀