EST技术及其在基因全长cDNA克隆上的应用策略_何志颖.pdfVIP

国外医学遗传学分册　2002 年　第 25 卷　第 2 期 ·67 · E ST 技术及其在基因全长 cDN A 克隆上的应用策略 何志颖　姚玉成 综述　胡以平 审校 (第二军医大学细胞生物学教研室, 上海 200433) 　　摘要: 随着人类基因组计划的顺利进行, E ST 技术被广泛应用于基因识别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域。 利用人类基因组研究不断产生的数据, 从 E ST s 即 cDN A 的部分序列入手, 通过同源筛选, 获得基因部分乃至全长 cDN A 序 列, 避免或减轻了构建与筛选 cDN A 文库等繁琐的实验室工作。本文从原理、应用及其在科学研究上产生的影响等方面对 E ST 技术进行了概述。 关键词: E ST 技术; “电子”基因克隆; 生物信息学; 基因 ( ) 中图分类号: Q 785　文献标识码: A 　文章编号: 100 11048 2002 　 　 表 达 序 列 标 签 ( exp re ssed sequ en ce tag s, 1　E ST s 与基因识别 E ST s) 是指从不同组织来源的cDN A 文库中随机 挑选克隆进行 5 ′或 3 ′端测序后得到的部分 cDN A E ST 技术最常见的用途是基因识别, 传统的全 [ 1 ] 基因组测序并不是发现基因最有效率的方法, 这一 序列。这一概念首次由 等于 199 1 年提出 。 A dam s [3 ] 近年来由此形成的技术路线被广泛应用于基因识 方法显得既昂贵又费时 。因为基因组中只有 2% 别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域, 并 的序列编码蛋白质, 因此一部分科学家支持首先对 [2 ] 基因的转录产物进行大规模测序, 即从真正编码蛋 且取得了显著成效 。在通过m RN A 差异显示、代 表性差异分析等方法获得未知基因的cDN A 部分 白质的m RN A 出发, 构建各种 cDN A 文库, 并对库 [4 ] [ 1 ] 中的克隆进行大规模测序 。 等 提出的表 序列后, 研究者都迫切希望克隆到其全长 cDN A 序 A dam s 列, 以便对该基因的功能进行研究。克隆全长cDN A 达序列标签的概念标志着大规模 cDN A 测序时代 序列的传统途径是采用噬斑原位杂交的方法筛选