TaqDNA聚合酶制备技术的优化.pdfVIP

维普资讯 第 22卷 第 4期 四川农业大学学报 V01．22No．4 2004年 12月 JournalofSichuanAgriculttL~ University Dec．2004 OptimizationofPreparationTechniquesofTaqDNA Polymerase XIAOChao-wen，DUJuan，Llwan-ohen (MaizeResearchInstitute，SichuanAgriculturalUniversity，Yaan625014，Sichuan，China) Abstract：Byusingexpressionproductofenzymeprotein，enzmy eactivityandactivityratioasindexes， preparation techniquesareoptimizedthroughselectionof engineeringbacterium lines，transformation method s。inductionepx ressiontimenadII)，rG concentration．Totalenzymeactiviyt prepared、 thbac— terium JM109ishigherthna DH5a，transformationratioof electricshockishigherthanheatshock， nadenzmy eproteinexpressionproduct，enzmy eactivitynadactiviyt ratioinducedby1．0mmol／L If叮-G for12haresignificantlyhigherthna otherconcentrationnaddurationofII)，rG induction．The resultsofSD PAGE elcertophoresisnadPCRamplifiactionindicatethattheenzymeproductprepared withtheoptimizedtcehniques meetstherequirementsofmolecularbiologicalexperimentinpurifiac- tion，activitynadspecificiyt．A1ltheindexes of theproductraebetterthancommercialenzymeprod— ucts inmarket． Keywords：TaqDNA polymerase；preparation；optimization；E ．coli TaqDNA聚合酶制备技术的优化。 肖朝文，杜 娟，李晚忱 “ (四川I农业大学 玉米研究所，四川 雅安 625014) 摘要：以酶蛋白表达量、酶活性和比活性为指标，从工程茵菌株、转化方法、诱导表达时间、诱导剂浓度4个方面，对 TaqDNA聚合酶制备技术进行了优化筛选。用JM1O9菌株制备的总酶活力高于DH5a，电击法的转化率高于热激 法，用1．0mmol／L1PTG诱导 12h，酶蛋白表达量、酶活性和比活性均显著高于其他浓度和时间的处理。SDPAGE 电泳和PCR扩增结果表明，用优化技术制备的TaqDNA聚合酶，纯度、酶活力和特异性均达到分子生物学实验的 要求，各项指标优于市售商品酶。 关键词：TaqDNA聚合酶；制备；优化；E．coli 中图分类号：Q789 文献标识码：A 文章编号：100o一2650(2004)04—0318一o4 从嗜热水生菌 TherTnu$aquaticus中分离的 而另一些方法又过于繁琐，增加生产成本[4一lol。本 TaqDNA聚合酶，分子量为94kDa，由832个氨基 研究拟从工程菌菌株、转化方法、诱导表达时间和诱 酸残基组成，热稳定性好，在 75～80℃条件下每个