实验二土壤微生物的分离鉴定.pptVIP

* * 微生物学实验 实验二 土壤微生物的分离鉴定 实验目的 2. 通过从土壤中分离微生物，初步掌握微生物的分离 鉴定方法。 1. 掌握微生物的分离鉴定原理。 实验原理 该实验采用平板分离法，本方法由于操作比较简单，普遍应 用于微生物的分离和纯化。其原理主要包括两方面： 1. 在适合于微生物的生长条件（如营养、温度、酸碱度、氧气等）下培养待分离微生物，或者加入某种抗生素形成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，进而筛除一些不需要的微生物。 2. 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁 殖形成的。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养的微生物。获得单个菌落的途径可通过稀释涂布平板或平板划线等方法来完成。 实验器材 （一） 牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，试管，离心管（50ml）培养皿， 电子天平，高压蒸汽灭菌锅，无菌操作台，恒温培养箱，移液 枪（枪头），pH试纸（pH 6.4~8.0）。 （二） 土样 实验步骤 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 　　　　3g 　蛋白胨 　　　　10g 　NaCl 　　　　　5g 　　　琼脂 　　　　　15～20g 　　　水 　　　　　　1000ml 调节pH 至7.2～7.4 1. 配制培养基 2）121℃灭菌20min，倒平板固体培养基。 2.制备土壤稀释液 称取10g土样，放入盛有90ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中， 振荡摇匀10min 使土和水充分混合，然后用移液枪从三角瓶中吸取 1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的离心管中， 混合均匀，以此类推分别制成制成0.1、0.01、0.001和0.0001不同稀 释度的土壤溶液。(本实验采用50ml离心管盛无菌水) 3. 涂布培养 把0.01、0.001 和0.0001三个浓度的土壤稀释液作为涂布平板 的含待分离微生物的菌液，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培 养基上，共有9个培养基平板，标号，37℃温箱培养24~48 h。 4. 划线分离（划线培养） 对土壤稀释溶液微生物的培养基平板进行观察，记录区分明显 的细菌特征。挑取此细菌在新的培养基中划线培养（每种细菌培养 3个培养皿），标号，37°C温箱培养。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法4.放射法 5.四格法 5、初步鉴定 对菌体进行革兰氏染色观察，记录结果。 注意事项 制备土壤稀释液时，要注意应使土样均匀分散在稀释液中。 2. 无菌操作。