γ-聚谷氨酸腺苷甲硫氨酸盐的制备.pdfVIP

团卜———二————————————————～2眦，vo心9№4编。孑名。麓。三，慧 doi：10．3969／j．issn．1672—5425．2012．04．016 y一聚谷氨酸腺苷甲硫氨酸盐的制备 王鹛。詹长娟。杨军方。李大力 (南京理工大学环境与生物工程学院，江苏南京210094) 摘要：从纳豆芽孢杆茵发酵液中分离纯化得到r聚谷氨酸(),-PGA)，通过酿酒酵母发酵提取S-腺苷甲硫氨酸 振氢谱对其结构进行了袁征。 关键词：7-聚谷氨酸；提取；S-腺苷甲硫氨酸，卜聚谷氨酸腺苷甲硫氨酸盐 922．1R977．4 中图分类号：TQ 文献标识码：A r聚谷氨酸(7-Polyglutamicacid，rPGA)是由谷它试剂均为国产分析纯。 氨酸通过y-酰胺键结合形成的一种多肽大分子，应用 1．2培养基 于生物医药材料、化妆品、食品、分散剂、螯合剂、建筑 纳豆芽孢杆菌发酵培养基(g·L一!)：葡萄糖30， 涂料等领域[1~41。目前，制备rPGA的方法有化学合酵母粉8，谷氨酸钠60，NaCI45，pH值7．0，于37℃、 220 成法、提取法、微生物发酵法，其中微生物发酵法较适 r·min。1摇床培养4d。 合于工业化生产[5卅]。 酿酒酵母发酵培养基(g·L-1)：蔗糖40， NH4N03 0．3， §腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine，SAM)5，MgS04·7H200．4，ZnS04·7H20 也称S一腺苷蛋氨酸，是人体内一种重要的生理活性物 FeSO‘·7H200．2，CaCl20．3，K2HP040．8，KH2P04 质，参与多种生化反应，如转甲基、转硫、转氨丙基等， 是半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽、辅酶A等重要物质的 30℃、150r·min-1摇床培养24h。 前体[8]，在治疗肝炎、肝功能紊乱、关节炎、抑郁症、心 1．3方法 血管疾病以及抗衰老、防癌等方面发挥着重要作用，市 1．3．1尹PGA的提取与纯化D3,143 000 场需求日益增大[8’91。SAM在pH5时易分解，与有将纳豆芽孢杆菌发酵液以10 r·min_1离心 机分子形成盐有利于提高sAM的稳定性[1”12]。 15min除去菌体；在上清液中加入2BV乙醇，用玻璃 natto) 作者利用从纳豆芽孢杆菌(Bacillus NL365发酵液中提取纯化的7-PGA，制备了r聚谷氨新溶解后，用1 酸腺苷甲硫氨酸盐(rPGA—SAM)，以利用rPGA的至出现白色絮状沉淀；5000×g离心10min，收集沉 空间位阻来提高SAM的稳定性，有利于SAM在临床淀，用70％乙醇洗涤，冷冻干燥，即得纯化的rPGA。 上的应用。 1．3．2酿酒酵母细胞SAM的提取及其硫酸盐的制 备 1 实验 将酿酒酵母发酵液以5000 1．1菌种与试剂 min，收集菌体；按150I￡L·(g湿酵母)．1加入乙酸乙 mL0．35 rain；加入18 纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)NL365、酿酒酵母酯，剧烈搅拌30 tool·L一1的硫