以环糊精准聚轮烷为“假载体”印迹识别蛋白质的研究.pdfVIP

第42卷 分析化学(FENⅪⅧ『AⅪJE)研究报告 第2期 2014年2月 Qlille∞Jo啪alof 186～191 AnalyticalCh锄isny DOI：lO．37“／SP．J．1眇6．加14．姗38 以环糊精准聚轮烷为“假载体印迹识别蛋白质的研究 张芸1 郭敏杰“ 么敬霞1 陈鑫1 刘靖1 樊志1 周庆礼2 1(天津科技大学理学院，天津300457)2(天津市食品加工工程中心，天津300457) 摘要实验以聚乙烯醇分子为客体分子，与，-环糊精(y—cD)分子组装制备环糊精准聚轮烷(cD．PPRs)；在 金属离子存在下，以丙烯酰胺(AM)为单体，Jv，Ⅳ-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，以cD-PPRs为“假载体”，制备 Ac)用量增加，印迹聚合物吸附量先增加后减小，当CD—PPRs—Ac与AM的质量比为0．55时，印迹聚合物的吸 附量最大；在Cu“共存时，吸附量最高可达5．16mg／g；将cp—MIP用于4种混合蛋白溶液吸附，结果表明，引 入cD—PPRs使印迹聚合物的特异性吸附能力明显提高，特异性吸附量可提高约6倍。 关键词分子印迹聚合物；聚乙烯醇；环糊精准聚轮烷；假载体；蛋白质吸附 1 引 言 蛋白质分子印迹聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通过功能单体交联聚合而成u，2J，MIPs可以选 择性地从混合物中吸附分离模板蛋白，其制备方法主要有包埋法旧J、表面印迹法HJ，抗原决定基法∞J、 辅助识别链辅助法M7J、碳纳米管为载体法¨’及借助某些物质或载体在二维或三维空间上进行蛋白质 印迹旧1方法等。环糊精(cD)与链状大分子通过非共价键相互作用组装超分子聚集体，可形成准聚轮烷 o将环糊 精引入印迹体系，以三肽为模板分子，分别在硅胶、氧化铝薄膜及聚羟乙基丙烯酸甲酯表面制备了印迹 聚合物。 本实验将环糊精准聚轮烷充当“假载体”，参与交联聚合过程而被固定在聚合物网络中，以实现功 能单体与目标分子良好的空间匹配，从而达到对模板蛋白的专一性识别¨5|。印迹吸附过程见图l。本 实验提出的环糊精准聚轮烷这种“假载体”有别于小分子单体，由于cD是低聚环状物，结构类似一截顶 圆锥，它能够在体系聚合过程中在横向和纵向空间上较好的维持与蛋白质匹配的空间结构而区别于普 通的包埋法印迹。CD的空腔直径约为1nm，其纵向尺寸也不超过10nm，因此对多数三维线长在 10nm这个数量级上的蛋白质而言，cD。PPRs并不提供一个真正的载体作用，因而称之为“假载体”。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 DYcz-24DN型电泳仪(北京市六一仪器厂)；Tu-1800PC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器 有限责任公司)；MIPAⅡ-xMu／H扫描电镜(美国sIRl0N公司)。 (LYs)，天津博迪化工有限公司；其余试剂均为国产分析纯。 2．2实验方法 2．2．1 PVA于100mL圆底烧瓶中，用20．0 CD．PP黜的制备称1．00g mL水溶解；加入3．00g h，循环5次。将反应物用乙醇沉淀，经水洗、分离、真空干 7一cD，80℃下回流12h，在室温下静置12 2013_07．28收稿．2013—10．20接受 本文系国家自然科学基金项目(Nos．2070403l资助 }E．mail：gIlo硼j@tust．edu．cn 万方数据 第2期 张芸等：以环糊精准聚轮烷为“假载体”印迹识别蛋白质的研究 导 图1 蛋白质印迹吸附过程示意图 for Fig．1StrategysyntIlesis《tlIep