基于电喷雾串联质谱的蓝藻寡糖脱果糖分析及系列α-1,2-葡聚寡糖的制备.pdfVIP

Vol.35 高等 学校 化 学 学报 No.12 2014年12月 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 2547 ~2550 doi:10.7503/ cjc 基于电喷雾串联质谱的蓝藻寡糖脱果糖分析及 系列α-1,2-葡聚寡糖的制备 1 2 1 张洪涛 ,朱 莉 ,詹晓北 (1. 江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室,无锡214122; 2. 江苏瑞光生物科技有限公司,无锡214125) 摘要 为获得系列α-1,2-葡聚寡糖,首先以蓝藻寡糖六糖、八糖、九糖和十糖为原料,在0.5mol/ L 的三氟乙 酸(TFA)中于95 ℃酸解9 min 以脱去还原端果糖,经低压凝胶色谱分离纯化,用电喷雾离子化-碰撞诱导解 离-串联质谱(ESI-CID-MS/ MS)和基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)鉴定和序列表征,获得了除去末 端果糖的α-1,2-五、七、八和九糖;然后在0.5 mol/ L 的TFA 中于95 ℃对混合蓝藻寡糖六糖和八糖酸水解 45 min,用Bio-Gel P2凝胶柱对混合物进行分离和纯化,并通过ESI-MS和MALDI-MS对获得的每个寡糖组 份进行表征,获得了聚合度为2,3,4 和6 的α-1,2-葡聚寡糖. 本研究为利用糖生物芯片技术进行α-1,2-葡 聚寡糖的功能筛选及分析其与靶标蛋白之间相互作用的特异性提供了葡聚寡糖物质基础. 关键词 蓝藻寡糖;脱果糖;α-1,2-葡聚寡糖;电喷雾串联质谱 中图分类号 O629.1 文献标志码 A [1,2] 寻找和发现新的寡糖和多糖已经成为寡糖研究的热点 ,快速发现这些寡糖的功能并探寻其作 [3,4] [5] 用机制备受关注 . 蓝藻粉具有抗肿瘤和抗病毒等功效,已作为功能食品上市 . 寻找和发现新的 [6] 功能因子是功能食品开发的关键 . 蓝藻寡糖是蓝藻所产生的,以蔗糖为基础,通过增加α-1,2-葡萄 糖单元的聚合度而得到的一系列寡糖. 低聚葡聚糖可通过与免疫系统信号蛋白CR3结合来激活免疫系 统,从而实现其抗肿瘤功效. 因此,从蓝藻蛋白中找到能够识别蓝藻寡糖的信号蛋白成为进一步阐明 [7] 蓝藻寡糖功能机制的关键. 只有糖链达到相应的聚合度,才能被功能信号蛋白识别 . 目前用于蛋白- [8] [9] [10] 寡糖研究的技术有核磁共振(NMR) ,电喷雾离子化质谱(ESI-MS) ,X射线(X-ray) 和表面激元 [11] 共振技术 等,但都存在通量低和对样品需求量大的缺陷;迄今,糖芯片技术已成为研究“糖-蛋白” 之间作用关系的高灵敏、高通量的有效方法[12,13]. 但是用该技术研究糖-蛋白作用关系时,作为探针的 [14] 寡糖必须带有醛基才能固定在芯片片基上 . 蓝藻寡糖末端通过1 2键与果糖相连,因此须去掉末